Всаа или протеин: Сравниваем BCAA и протеин | Что лучше

Сравниваем BCAA и протеин | Что лучше

Обновлено: 29.01.2021 13:31:19

Выбор спортивного питания требует максимально ответственного подхода. Неправильная пищевая добавка может в лучшем случае оказаться бесполезной, а в худшем – и вовсе навредить атлету. И то, что производители спортивного питания постоянно увеличивают ассортимент представленных продуктов, только усложняет стоящую перед атлетом задачу.

Начинающим атлетам для наращивания мышечной массы или замедления катаболизма предлагают множество спортивных добавок. Но наиболее часто рекомендуются протеин и аминокислоты BCAA. Что лучше выбрать – непонятно.

В этом материале мы разберёмся, что лучше – BCAA или протеин, а также проведём сравнение и выберем подходящее спортивное питание для разных атлетов.

Как работает спортивное питание

Прежде чем разбираться, что лучше, совершим небольшой экскурс в мир биохимии и протекающих в организме процессов метаболизма. Потому что только таким образом можно подобрать подходящее спортивное питание.

Практически любая поступающая в организм пища состоит из трёх основных нутриентов – белки, жиры и углеводы. Исключение составляют только простые неорганические соединения вроде соли или воды. А вот сахар – уже «органика» и на 99% состоит из углеводов.

В дальнейшем все эти нутриенты перевариваются. В желудке, кишечнике, печени и других внутренних органах они распадаются на более простые, но всё ещё органические вещества. Так, белки, являющиеся макромолекулами, распадаются на мелкие аминокислоты. Пищеварительные процессы, затрагивающие белковые вещества, начинаются в желудке и заканчиваются в тонком кишечнике.

Из тонкого кишечника аминокислоты усваиваются непосредственно в кровь. По сосудам вместе с другими телесными жидкостями они попадают в печень, где используются в дальнейшем метаболизме.

В печени аминокислоты превращаются в другие. Конкретный список продуктов метаболизма зависит от самого человека (точнее, его генетического кода), а также от принятых продуктов питания. Например, при метаболизме протеина создаётся одна группа аминокислот, так называемых протеиногенных, а при расщеплении и усвоении растительных белков – другая.

Полученные аминокислоты отправляются уже в мышцы, где и используются в качестве «строительного материала» для мускульной ткани, а также – в рамках локального метаболизма – насыщают мышцы энергией.

Казалось бы, необходимые аминокислоты вполне получаются из протеина. Зачем тогда нужны BCAA? Но не всё так просто. Во-первых, синтез новых аминокислот во многом зависит от особенностей пищеварения и метаболизма в организме. Во-вторых, из BCAA получаются не все желаемые нутриенты.

Спортивное питание необходимо организму в двух случаях:

1. Если требуются «ударные дозы» белков или аминокислот. Такое бывает при продолжительных интенсивных тренировках, развивающих мускульную ткань. Белков, получаемых из повседневного рациона, для «построения» мышцы явно недостаточно;

2. Когда в повседневном рационе наблюдается дефицит необходимых веществ. Так, например, в некоторые сезонные периоды питание естественным образом ограничивается. Либо после перенесённых заболеваний, когда организм истощил все свои ресурсы и требуется срочное восстановление.

Таким образом, спортсменам, особенно бодибилдерам или набирающим массу, различные пищевые добавки вроде протеина или комплекса аминокислот BCAA, необходимы в обязательном порядке. Ибо белков в повседневном рационе может просто не хватать.

BCAA – особенности и эффект

BCAA – это протеиногенные аминокислоты с очень сложной структурой. Главная их особенность – они не подвергаются метаболизму в печени. Из пищеварительной системы они попадают в кровь, а оттуда отправляются непосредственно в мышцы.

В мышечной ткани BCAA подвергаются катаболическим превращениям. То есть они распадаются на простые вещества с выделением энергии и молекул аденозинтрифосфата (АТФ). Всё это необходимо мышцам во время тренировок, чтобы они не начали разлагать сами себя.

Дело в том, что при физических тренировках мышцы как никогда нуждаются в энергии. Взять её им особенно неоткуда – либо пытаясь чего-нибудь сделать с углеводами, либо разлагая аминокислоты из собственных клеток. И второй вариант кажется мышцам наиболее эффективным. Катаболизм аминокислот высвобождает больше энергии, да и находятся они непосредственно в мускульной ткани.

В итоге получается, что мускулы «разлагают» сами себя. Это может привести как к уменьшению фактического их объёма, так и к появлению болевых ощущений либо других проблем с мускульной тканью.

Приём BCAA поможет избавиться от внутренних катаболических превращений, затрагивающих мускульную ткань. На энергию разлагаются непосредственно принятые аминокислоты, а не хранящиеся в самих мышцах.

В целом BCAA направлены на решение следующих проблем:

1. Нехватка энергии в мускулах. Благодаря катаболическим процессам непосредственно в мышцах BCAA повышают выносливость, продлевают время тренировки и улучшают результаты;

2. Появление мышечных болей после занятий. Поскольку мускулы не «переваривают сами себя», они и не разрушаются. А значит – риск боли после тренировки значительно снижается;

3. Улучшение анаболизма. Хотя сами BCAA не принимают участия в строительстве мышц, благодаря ускорению синтеза специальных белков они делают «производство» новой ткани более быстрым и эффективным.

4. BCAA рекомендуется применять непосредственно перед тренировочной сессией. Они очень быстро попадают из пищеварительной системы в кровь, откуда дальше отправляются в мышцы. Кроме того, их можно выпить и после упражнений как раз для снижения риска появления болей.

Достоинства

• Используются как источник энергии, предотвращают разрушение мышечной ткани;

• Повышают выносливость, помогают продлить время тренировок;

• Снижают риск появления болей после занятий;

• Быстро всасываются в кровь – практически сразу после приёма.

Недостатки

• Не обладают анаболическим эффектом. То есть сами по себе BCAA не ускоряют рост мышц, но благодаря некоторым «побочным действиям» способны незначительно увеличить их объём;

• Требуют точной дозировки.

BCAA обычно используются бодибилдерами и другими атлетами, чьи тренировки подразумевают высокую нагрузку на мышцы. Их можно порекомендовать также спортсменам, занимающимся кроссфитом.

Протеин – эффект и особенности

Протеин – это комплексное белковое спортивное питание. Ну, точнее, он содержит только один-единственный белок, собственно протеин, в больших количествах – до 99% массы. Тем не менее, он при пищеварении разлагается на множество незаменимых аминокислот.

В частности, в состав протеина входят и BCAA, и другие важные вещества. Поэтому он является комплексным спортивным питанием для решения сразу двух проблем – и катаболизм, и анаболизм.

Но стоит учесть два очень важных момента. Во-первых, все аминокислоты в протеине находятся в связанном виде. То есть желудочно-кишечному тракту требуется время на его переваривание и высвобождение этих «более простых» веществ. Во-вторых, концентрация каждой отдельной аминокислоты довольно низкая. Зато разнообразие – высокое.

Основная задача протеина заключается в приросте сухой мышечной массы. При метаболизме он разлагается на множество аминокислот, которые впоследствии используются в качестве «стройматериала» для новых мускулов. Многие из них получаются только при приёме этой пищевой добавки и никаким другим образом.

В целом протеин направлен на достижение следующего эффекта:

1. Прирост мышечной массы. Его приём вырабатывает огромное количество аминокислот, которые используются в качестве «строительного материала»;

2. Снижение катаболизма в отношении непосредственно клеток мускульной ткани. Он при переваривании выделяет BCAA, которые уменьшают боль и повышают выносливость;

3. Поддержание обменных веществ в мышцах в положительном направлении в отсутствие тренировок. То есть протеин способен обеспечить «правильный» катаболизм ночью или в продолжительные перерывы между занятиями.

4. Протеин рекомендуется пить каждый день. Разве что дозировка разнится. Незадолго до тренировочной сессии желательно выпить больше протеина, чтобы зарядить мускулы энергией и улучшить анаболизм, а в дни без занятий или перед сном – соответственно, меньше.

Впрочем, конкретные графики и дозировки разнятся в зависимости от рациона и желаемого эффекта.

Итак, подведём итоги.

Достоинства

• Анаболик. Стимулирует рост мышц, повышение физической силы и выносливости;

• Содержит огромное количество необходимых (в том числе незаменимых) аминокислот, которые направлены на улучшение протекающих в мускулах обменных процессов, в том числе BCAA;

• Стимулирует сжигание жира.

Недостатки

• Довольно медленно усваивается. Так, в виде концентрата он может перевариваться 1-2 часа в зависимости от особенностей организма;

• Существует во множестве вариантов, поэтому выбрать подходящий довольно сложно.

Протеин используется в первую очередь бодибилдерами для ускорения роста мускульной массы и повышения физической силы.

Теперь о разновидностях протеина. Они различаются не только происхождением, но и эффектом. Так, наиболее широко распространён сывороточный протеин, который содержит огромное количество молочных белков и поэтому может похвастаться высоким содержанием незаменимых аминокислот животного происхождения.

Для веганов или людей с непереносимостью лактозы предназначен соевый протеин. Он может похвастаться высоким содержанием BCAA, но из-за отсутствия аминокислот животного происхождения не может похвастаться ярко заметным анаболическим эффектом.

Сывороточный протеин существует в двух видах – концентрат и изолят.

Концентрат сывороточного протеина – это, по сути, высушенная сыворотка. Содержит множество дополнительных полезных веществ, но концентрация самого белка довольно низкая (30-80%). А ещё в нём есть углеводы в виде молочного сахара (лактозы). Но вот главный минус – это долгое переваривание, которое может занять до 1-2 часов в зависимости от особенностей метаболизма.

В изоляте сывороточного протеина полезных веществ крайне мало, а лактоза и вовсе представлена в следовых количествах. Зато содержание чистого белка – до 99%, а скорость переваривания крайне мала.

Сравнение

Итак, BCAA нужны для защиты мышц и снижения риска появления болевых ощущений, а протеин – для роста мускульной массы. Но разница заключается не только в этом.

Характеристика	BCAA	Протеин
Состав	100% аминокислоты	Зависит от формы. До 99% белка, а в некоторых случаях также аминокислоты и углеводы
Применение	Повышение выносливости, снижение мышечных болей	Рост мускульной «сухой» массы, повышение выносливости, снижение болевого синдрома
Скорость усвоения	До 10-20 минут после приёма	До 1-2 часов после приёма
Эффект жиросжигания	Нет	Есть
Кому лучше использовать	Опытным спортсменам перед высоконагруженными тренировками	Начинающим и опытным спортсменам в течение всего времени набора массы
Когда лучше пить	Перед тренировками и после них	Перед тренировками, после них, утром и вечером

BCAA и протеин имеют разную направленность. И, в принципе, протеин – это комплексное спортивное питание, которое содержит в составе BCAA. Так что при его приёме можно обойтись и без других добавок.

Кроме того, BCAA и протеин можно принимать вместе. Тогда эффект от использования обоих видов спортивного питания будет улучшен. Однако важно рассчитать дозировки и время приёма.

В частности, дозировку BCAA лучше уменьшить. Аминокислотный комплекс рекомендуется пить за 20-30 минут до протеина. В этом случае прирост массы пойдёт быстрее – больше продуктов метаболизма белка будут использованы организмом для «строительства» мышц.

Перед одновременным приёмом протеина и BCAA рекомендуется проконсультироваться с врачом. Конечно, риск вреда от этих препаратов минимален, однако стоит учитывать индивидуальные особенности организма.

Оцените статью
	Всего голосов: 1, рейтинг: 4

BCAA или протеин, что лучше после тренировки?

03 октября 2016 г.

Практически все протеины содержат в составе ВСАА. Вопрос только в том, сколько именно незаменимых аминокислот вы получите в каждой порции.

После тренировки. BCAA, или протеин? 

Люди, занимающиеся спортом и переходящие на использование специализированного питания, интересуются, что лучше после тренировки BCAA или протеин?

Во время спортивных упражнений, в особенности, силовых, мышцы повреждаются. Процесс их восстановления требует наличия в организме определенных веществ. Одни являются строительным материалом, другие – катализаторами процесса. 

ВСАА участвуют в анаболизме, предотвращают катаболизм, способствуют быстрому восстановлению мышц, их ускоренному росту. Они являются незаменимыми, так как, в отличие от других аминокислот, могут быть получены только из продуктов. Лейцин, изолейцин и валин не синтезируются. Их недостаток критичен для спортсмена. 

Не совсем корректно сравнивать протеиновый коктейль и добавку ВСАА. Часто производители добавляют последние в состав своих протеиновых продуктов. Если вы не обнаружили знакомую аббревиатуру в составе, можете смело покупать добавку отдельно.

Протеин, или BCAA при похудении 

Следующий вопрос – что лучше для похудения BCAA или протеин? 

Плюс протеина в том, что вы получаете полноценный белок, из которого организм естественным образом получает все нужные аминокислоты. Минус – время, требуемое на этот процесс. 

Если вы принимаете ВСАА отдельно в виде порошка, усваиваются они очень быстро. Чуть медленнее – в капсулах. Принимать нужно перед тренировкой и после неё. Если задача – снижение аппетита, есть смысл использовать это средство после еды. 

Стоит отметить, что комплекс БЦАА прекрасно совместим с протеином. Вы можете смело употреблять их одновременно. Никаких негативных последствий такого способа медицина не зафиксировала. Важно лишь соблюдать указанную дозировку, и не употреблять больше аминокислот, чем организм способен полноценно усвоить.

Как выбрать и где купить BCAA? 

Если вы в ближайшее время планируете купить БЦАА, рассмотрим популярные варианты: 

• Maxler BCAA 7500 (150 капс.). Чтобы организм спортсмена получал с каждой порцией нужную дозу лейцина использовано соотношение 3:1:1;
• Fit Foods Mutant BCAA в порошке и капсулах (200/400 шт). В составе содержатся не только незаменимые аминокислоты, но и запатентованный комплекс BioPerine®, способствующий быстрому усвоению БЦАА.
• MusclePharm BCAA 3:1:2 (215 гр.) – порошковая форма выпуска. Считается, что 3 грамма лейцина, 1 грамм изолейцина и 2 грамма валина – идеальное соотношение аминокислот, обеспечивающее рост мышц, их защиту от разрушения, быстрое восстановление после тренировок; 

Также пользуются успехом комбинированные продукты, такие, как: 

Выбирайте подходящий вам вариант. Приобрести его с доставкой можно в магазине http://zel-sport-pit.ru.

Видео: Выбор протеина и BCAA на сушку?

Что лучше? Протеин или аминокислоты? А может ВСАА?

ЧТО ЛУЧШЕ? ПРОТЕИН ИЛИ АМИНОКИСЛОТЫ? А МОЖЕТ БЦАА?

У меня есть замечательный справочник по всем спортивным добавкам, который я получила, когда готовилась к экзамену по спортивной нутрициологии. Когда я его читаю, то у меня возникает непреодолимое желание скупить все подряд в спортивном магазине, потому что мне кажется, что именно такой добавки у меня нет и она мне просто жизненно необходима. Реально иногда себя приходится просто за уши оттягивать.

В общем, что надо купить из спортивного питания? а что вообще не нужно?

В чем разница между протеином, аминокислотами и БЦАА и что из них выбрать предпочтительнее? Можно ли их совмещать, и являются ли они взаимодополняемыми или взаимозаменяемыми?

Пропустим часть «зачем нужен протеин». Оставим только краткую справку: функция протеина — «построение» и восстановление тканей, выступает, как основной компонент в иммунной системе, транспорт внутри организма и так далее.

Протеин состоит из аминокислот, которые связаны между собой пептидными связями. Для того чтобы принятый протеин усвоился, организм разрушает все пептидные связи аминокислот, затрачивая при этом много энергии, и только потом запускается процесс усваивания белка.

Существуют «быстрые» и «медленные» белки. Например, изолят относится к «быстрым», усваивание его происходит организмом в короткое время, но снабжение аминокислотами в этом случае поддерживается на определенном уровне еще пару часов. Такой протеин идеален после тренировки.

Медленный белок-казеин, который на протяжении 8-12 часов снабжает организм аминокислотами, оказывая антикатаболический эффект. Такой протеин идеален на ночь.

Аминокислоты — составляющие белка. Обычно аминокислоты выпускают в свободной форме. В результате полной гидролизации (расщепления) белковых молекул, свободные аминокислоты начинают всасываться в кровь и попадают в ткани организма буквально спустя 10-15 минут после приема. Организм использует их для собственного роста, восстановления, укрепления и выработки различных гормонов, антител и ферментов.

Моя рекомендация покупать не весь набор аминоккислот, а EAA — essential amino acids. То есть только незаменимые аминокислоты, которые мы получаем с пищей. А если ваше питание так себе, то брать их вам неоткуда. Грубо говоря, EAA- помогают в построении новых мышц, так как полный набор аминокислот необходим для синтеза протеина и построения мышечного волокна.

БЦАА — это 3 незаменимых аминокислоты валин, лейцин и изолейцин. То есть это, грубо говоря «часть» EAA. Обычно именно их пьют горстями все спортсмены - бодибилдеры. Именно они нужны для поддержания мышечной массы и для снижения катаболических процессов в организме. БЦАА помогают увеличивать количество азота в мышцах, что предотвращает потерю чистой мышечной массы вследствие дефицита калорий и интенсивных тренировок.

А теперь самое важное: ЧТО И КОГДА?

— Казеин лучше на ночь или вместо приема пищи, чтобы дольше сохранить сытость. После обычного протеина вы будете голодны уже через час-полтора.

— Изолят протеина подойдет после тренировки, чтобы мышцы получили питание быстро, но в то же время еще около часа-полутора (как раз до послетренировочного приема пищи) у вас в крови будет оптимальная концентрация аминокислот.

— БЦАА — это не полноценный протеин. Это только 3 аминокислоты из 8 незаменимых. Лучше всего принимать их ВО ВРЕМЯ или после тренировки для быстрого восстановления.

— БЦAA нужны если ваша задача построение мышц (даже во время сушки).

p.s. Важно знать, что протеин и аминокислоты – это не чудо продукты для набора мышечной массы или похудения. ЭТО ДОБАВКИ К СБАЛАНСИРОВАННОМУ ПИТАНИЮ.  Tatiana Tivikka.

 

BCAA и протеин как принимать

Как принимать BCAA и протеин – вместе, или по отдельности? И нужно ли вообще принимать обе добавки, или хватит и одной? Эти вопросы уже давно обсуждаются в мире бодибилдинга, так как на первый взгляд их смешивание не имеет смысла, но, это только первое впечатление.

Совместимость добавок

Первое, что интересует человека, задавшегося вопросом совместного приема этих добавок – это их совместимость друг с другом. Что же, она просто превосходная. Протеин – это белок, состоящий из аминокислотных цепочек, а BCAA – это изолированные главные аминокислоты – валин, лейцин, изолейцин.

Вместе BCAA и протеин образуют идеальную связку – протеин обеспечивает постепенное снабжение организма белком и аминокислотами, а BCAA «загружает» быстро и качественно, давая заряд на тренировку.

Как уже говорилось, протеин состоит из аминокислот, в частности, около 20% состава сывороточного протеина приходится как раз на BCAA, и их дополнительное употребление может показаться делом бессмысленным, если не знать свойств каждого из продуктов. Перед тем, как принимать BCAA и протеин, будет не лишним узнать, что аминокислоты, входящие в состав протеина, связаны межу собой — они образуют пептидные цепи, и для полного усвоение должны еще разложиться в кишечнике на составляющие. Это происходит относительно быстро, как для спортивной добавки, но не идет ни в какое сравнение со скоростью усвоения BCAA в чистом виде.

Этот комплекс состоит из трех изолированных  аминокислот:

• — валин;
• — лейцин;
• — изолейцин.

Как и когда принимать

Возвращаясь к вопросу, можно ли смешивать протеин и BCAA, стоит оговориться, что конкретно смешивать их не стоит. Принимать вместе – да, но не одновременно. Это не вредно, не опасно, но нерационально. Протеин усваивается медленнее, чем BCAA, и если смешать оба продукта вместе, то получится что-то среднее.

Если вы уже принимаете протеин или аминокислоты по отдельности, то можете не нарушать существующую схему приема. Главное – это не принимать BCAA и протеин вместе, то есть не смешивать их. В противном случае достоинства BCAA в виде высокой скорости усвоения сойдут на нет, так как соединившись с более медленными цепочками в протеине они примут их свойства.

Прием протеина осуществляется, как правило, за 30-40 минут до начала тренинга, а вот БЦАшки стоит пить перед самым началом занятий, или уже после начала, в перерыве.

Помимо варианта принимать протеин и BCAA вместе, многие присматриваются к протеинам с уже входящим в их состав BCAA. Такой коктейль имеет место быть, но если вам нужен быстрый, качественный результат, то лучше по отдельности употреблять чистый протеин и комплекс BCAA.

Принимать протеин можно утром, за 30 минут до или через 30 минут после тренировки. Этой добавке необходимо время на расщепление, ведь даже быстрый сывороточный протеин усваивается медленнее BCAA. Аминокислоты же принимать стоит непосредственно перед тренировкой, или даже во время нее.

Когда и как принимать протеин и BCAA:

1. 1. С утра одна порция протеина, чтобы восполнить растраченные за ночь запасы.
2. 2. Одна порция за 30-40 минут до тренировки – она даст организм силы для выполнения упражнений.
3. 3. Перед началом упражнений или даже в перерыве принимаем BCAA.
4. 4. Еще одну порцию протеина можно принять спустя 30-40 минут после тренировки, чтобы постепенно восполнялся аминокислотный баланс.

Говоря о том, как принимать протеин и BCAA, речь идет о сывороточном и комплексном протеине. Казеин принимается иначе, так как его скорость усвоения еще ниже, и его нужно пить перед сном или если планируется большой промежуток времени между приемами пищи.

Протеин и Bcaa. Можно ли совмещать? | Всё обо всём

Протеин и BCAA очень часто ставят в один ряд, сравнивают и противопоставляют друг другу. Это можно объяснить белковой природой происхождения как первой, так и второй спортивной добавки. Более того, обе добавки производятся из одних и тех же органических продуктов питания. Тем не менее, они позиционируются на рынке спортивного питания как добавки, предназначенные для разных целей, отчего и область применения и цели применения также могут сильно отличаться. Наша с вами задача сегодня разобраться в том, что из себя представляет каждая добавка. И начнем мы, пожалуй, с самых основ, с определения того, что такое протеин, а что такое BCAA.

Сравнение воздействия

Протеин переваривается и всасывается от получаса до двух часов, аминокислоты усваиваются почти мгновенно. Таким образом, суммарная польза для набора мышечной массы будет ощутимой. Протеин после усвоения еще до 12 часов находится в крови в виде свободных аминокислот, в то время как BCAA – не более 1,2 часа. Комплексный протеин более богат за количественным составом аминокислот, но проигрывает в скорости усвоения.

Совместимость добавок

Первое, что интересует человека, задавшегося вопросом совместного приема этих добавок – это их совместимость друг с другом. Что же, она просто превосходная. Протеин – это белок, состоящий из аминокислотных цепочек, а BCAA – это изолированные главные аминокислоты – валин, лейцин, изолейцин.
Вместе BCAA и протеин образуют идеальную связку – протеин обеспечивает постепенное снабжение организма белком и аминокислотами, а BCAA «загружает» быстро и качественно, давая заряд на тренировку.
Как уже говорилось, протеин состоит из аминокислот, в частности, около 20% состава сывороточного протеина приходится как раз на BCAA, и их дополнительное употребление может показаться делом бессмысленным, если не знать свойств каждого из продуктов. Перед тем, как принимать BCAA и протеин, будет не лишним узнать, что аминокислоты, входящие в состав протеина, связаны межу собой — они образуют пептидные цепи, и для полного усвоение должны еще разложиться в кишечнике на составляющие. Это происходит относительно быстро, как для спортивной добавки, но не идет ни в какое сравнение со скоростью усвоения BCAA в чистом виде.

Можно ли смешивать протеин и BCAA?

Довольно часто можно увидеть, что после тренировки атлеты запивают аминокислоты уже готовым в шейкере протеином. Кому-то это может показаться слишком диким способом, а кто-то по-другому и не видит. В конечном счете, всех интересует ответ на вопрос: а можно ли смешивать эти две добавки? Можно, ничего страшного не произойдет. Здесь вопрос, скорее, касается целей такой варианта приёма. Если вам важно как можно скорее обеспечить свой организм питательными веществами, то принимать вместе с БЦАА ещё и протеин – не лучшее решение. Так аминокислоты будут усваиваться гораздо дольше. Другое дело, если вы просто хотите максимально загрузиться и обеспечить хороший запас белка – тогда смешивайте и принимайте.

Из всего этого важно запомнить, что BCAA обеспечивают мышцы необходимым топливом и компенсируют энергозатраты в течение максимум 30 минут после приема. Протеиновый порошок не может похвастаться такой быстрой усвояемостью, ему еще надо будет пройти процесс распада на аминокислоты, и только потом это все попадает в мышцы.

Когда принимать протеин и BCAA

• С утра одна порция протеина, чтобы восполнить растраченные за ночь запасы.
• Одна порция за 30-40 минут до тренировки – она даст организм силы для выполнения упражнений.
• Перед началом упражнений или даже в перерыве принимаем BCAA.
• Еще одну порцию протеина можно принять спустя 30-40 минут после тренировки, чтобы постепенно восполнялся аминокислотный баланс.

Заключение

В любом случае, обе добавки незаменимы для качественного набора мышц. Но стоит помнить, что аминокислоты и БЦАА – основной материал для роста мышц, они также присутствуют и в протеине (в разных пропорциях). Единственное, что многие нежелательные для спортсмена компоненты содержатся в протеиновом порошке, а в БЦАА их нет. Поэтому внимательно изучайте состав добавки и сопоставляйте со своими целями, возможно, при правильном и сбалансированном питании будет достаточно одних аминокислот.

что нужно знать о «святой троице» спортпита

Один из наших любимых мифов – «бодибилдеры втирают протеин в тело», что приводит к «половому бессилию». Говорят это те, кто боится не то что попробовать спортивное питание, но и хотя бы немного о нём узнать. Забегая вперёд, хотим отметить, что грамотное употребление этих добавок помогает достичь нужных результатов роста мышечной массы, а здоровью не вредит. Даже если втирать протеин в интересные места – вдруг кому-то захочется проверить.

Влияние протеина на мышцы

Правильное название – сывороточный протеин, то есть белковая смесь, которую получают из обычной молочной сыворотки. Да-да, той самой, что остаётся после изготовления творога и сыра. Для краткости его называют просто протеином, и сейчас это лучший источник дополнительного белка для спортсмена, если в пище его недостаточно.

Состав протеина «из банки»: бета-лактоглобулин, альфа-лактальбумин, сывороточный альбумин и иммуноглобулины, незаменимые аминокислоты, цистеин и метионин (которые могут перейти в мощный антиоксидант глутатион). Все основные и вспомогательные вещества получают из коровьего молока, поэтому говорить о вреде при разумной дозировке даже не стоит.

Основная функция этой добавки – обеспечение положительного азотного баланса, который улучшает процессы анаболизма, то есть условий для роста и укрепления мышц, а также их восстановления после интенсивных тренировок. Если вы потребляете достаточно продуктов с высоким содержанием белка, а в зал приходите для поддержания формы пару раз в неделю, то от протеина пользы не будет, как и очевидного вреда. Не усвоенный белок покинет организм естественным путём.

Другое дело – бодибилдеры и те, кому хочется срочных результатов. Здесь не обойтись без помощи тренера, который поможет составить диету и расскажет, сколько протеина пить сверх рациона. Выпускают его в трёх видах: изолят (на банке обычно указано WPI), концентрат (WPC) и гидролизат (WPH). Доля биологически активных веществ и лактозы в концентрате составляет от 29% до 89%, он дольше усваивается и питает мышцы.

Изолят всасывается быстрее, но и стоит дороже, он лучше очищен от вспомогательных веществ и содержит более 90% активных веществ. Гидролизат – самый дорогой вид протеина, он мгновенно доставляет аминокислоты мышцам и способствует скорейшему восстановлению. Кроме кусачей цены, гидролизат, в отличие от молочных по вкусу концентрата и изолята, горький.

Гейнеры, или строительные кирпичи мускулатуры

Сам по себе чистый белок не принесёт пользы, если у атлета нет достаточно энергии для тренировок. Её он получает из углеводов, поэтому пить протеин без нужного питания не имеет смысла. Гейнеры (от английского gain – «прирост») – это смесь белковых соединений с довольно большой концентрацией углеводов. Он даёт энергию для выполнения упражнений и снабжает мышцы строительным материалом. По большому счёту, и одного гейнера достаточно для лучших результатов – в нём и белок, и углеводы. Билдерам же придётся купить обе банки, поскольку потребность в добавках у них выше.

В составе гейнера – белково-углеводные смеси с добавлением креатина, витаминов, аминокислот и других полезных веществ, и немного полезного жира. По сути, это такая удобная большая порция гречки или макарон, которая насыщает энергией и имеет шоколадный (или любой другой) вкус. Раньше гейнеры делали из смеси неочищенного белка, сахара и жиров, сейчас это сбалансированная смесь «быстрого» белка и полезных углеводов.

Гейнер нужен тем, кто находится на программе набора массы, для «сушки» и похудения дополнительная порция калорий будет просто лишней. Добавка подойдёт и подвижным спортсменам – футболистам, легкоатлетам и другим адептам аэробных нагрузок. Гейнеры также хорошо работают на восстановление мышц после тренировок. Передозировка «страшна» так же, как избыточное употребление протеина – естественным выводом из организма.

BCAA

Правильно не «вэ-сэ-а-а», а «би-си-эй-эй», то есть branched-chain amino acids – аминокислоты с разветвлёнными боковыми цепями. Не углубляясь в химию и биологию, достаточно сказать, что BCAA состоят из лейцина, изолейцина и валина, это самые важные аминокислоты, необходимые для качественного протекания процессов производства мышечного белка.

Все три аминокислоты входят в смесь по той причине, что их одновременно выделяют из белка или биосинтезируют, а вот отделить их друг от друга уже сложно и дорого. BCAA являются незаменимыми аминокислотами, треть всех аминокислот в мышцах – они. Организм BCAA сам не производит, поэтому единственных их источник – пища и добавки, причём они усваиваются именно в мышцах и служат лучшим топливом.

Далеко не все медицинские и спортивные исследования однозначно подтверждают серьёзное влияние BCAA на результаты атлетов. Зато те же исследования однозначно говорят о полной безопасности для здоровья человека. Впрочем, оно и неудивительно: BCAA содержатся в мясе, рыбе, молочных продуктах, яйцах и птице – разумеется, в гораздо меньшей концентрации, чем «из банки».

Кому следует принимать дополнительные протеин, гейнер и BCAA? Всем, кто занимается спортом и фитнесом ради серьёзных результатов и впахивает на каждой тренировке. Плюс таких добавок в том, что дозировка натуральных биологически активных веществ в них точно выверена химиками, тогда как продукты из магазина могут содержать разную концентрацию белков, углеводов, жиров, аминокислот и других веществ.

Спортпит «лечит» ваши мышцы и наиболее быстро и безопасно их восстанавливает, поэтому часто его нужно принимать не только до, но и после тренировки. Дополнительное питание совершенно безопасно для организма, а передозировка просто не принесёт пользы. Не будет полезной и «еда из банки» тем, кто потребляет её просто так. Без существенных нагрузок на одном спортпите о взрывном росте мышц можно и не мечтать. Поэтому скачивайте наше мобильное приложение Sport Priority (оно бесплатно) и подберите для себя подходящего тренера и зал рядом с вашим домом или работой. А если уже куда-то ходите, попробуйте бесплатные пробные тренировки в неожиданных для вас направлениях. Новый спортивный опыт бывает очень захватывающим!

что лучше и как принимать вместе

Каждый, кто начинает свой путь в бодибилдинге или просто набирает массу, задумывается о приеме популярных добавок – BCAA или протеина. Но что лучше и в чем кардинальная разница? У всех добавок разные формы выпуска, составы, хотя исходным сырьем являются молекулы протеина. Но для одних спортсменов лучше чистые аминокислоты, а для других подойдут и протеиновые коктейли. Давайте разберемся, что и как принимать?

Содержание

В чем разница BCAA и протеина

В наших статьях уже много информации о протеине, о способах его изготовления в производстве и его видах. Протеин различается по исходному сырью – растительные или животные источники, а так же по степени усвоения (быстрые и медленные). Например, казеин усваивается частично от 1 до 8 часов, а сывороточные изоляты и гидролизаты от 30 до 60 минут. Но суть протеина в том, что это крупные белковые молекулы, полученные в процессе производства – отфильтрованные и высушенные.

А BCAA – это незаменимые аминокислоты с разветвленной цепью, полученные в процессе распада белка. То есть аминокислоты – это составляющие молекулы протеина. А значит, и усваиваются молекулы BCAA намного быстрее, так как в организме пропускается процесс распада белка на аминокислоты с помощью ферментов. Обычно, аминокислоты BCAA – лейцин, изолейцин, валин, усваиваются за 20-30 минут.

Если протеин может включать в себя помимо белка много ингредиентов – жиры, углеводы (сахар и клетчатка), витамины, минералы, все аминокислоты, как заменимые, так и незаменимые, ферменты и иногда даже креатин, то BCAA содержат только 3 вида аминокислот в различных пропорциях, можно встретить 2:1:1 или 4:1:1 (первый показатель — лейцин).

Итак, аминокислоты – это составляющие частицы молекул протеина, принимая добавку протеина, в конечном итоге продукт распадается до тех же аминокислот, но процесс занимает больше времени, а количество тех же БЦАА может быть значительно меньше. К тому же дополнительные ингредиенты могут способствовать увеличению не только мышечной массы, но и подкожного жира и задерживать лишнюю воду в организме. В то время как BCAA способствуют набору исключительно сухой массы и быстрее предупреждают катаболизм – разрушение мышц.

Что лучше выбрать —  BCAA или протеин, и для каких целей?

Разницу разобрали, теперь выясним пользу отдельных добавок относительно целей спортсмена.

Если целью тренировок является набор мышечной массы, стоит обратить внимание на протеин, причем, на несколько видов – быстрый и медленный. В данном случае протеин выступает заменой пищи для спортсмена после тренировок и в течение дня. Быстрые протеины – быстро восстанавливают, насыщают материалом для роста мышц, как белками, так и углеводами, а медленные – долго усваиваются для постоянного насыщения белком, даже на протяжении ночного сна.

Значит, тем, кто набирает массу, лучше принимать протеин, а его составляющие и дозировки выбирать в зависимости от конституции, показаний, формы белка и цены.

Что касается аминокислот, они способны так же быстро восстановить организм, обеспечивая синтез новых клеток, а также быстро предупредить катаболизм, но насыщать белком долгое время BCAA не способны. Да и с ними необходимо употреблять больше пищи, так как суточную потребность в БЖУ они не отменяют и не дополняют, в отличие от протеина.

В БЦАА не ничего лишнего, никаких ингредиентов, в виде сахара, который способствует усложнению процесса похудения, особенно, это важно при диабете и тем лицам, которые ограничивают сахар в рационе.

Когда лучше принимать незаменимые аминокислоты и протеин

Протеин лучше принимать 2 раза в день:

1. сразу после тренировки;
2. и в течение дня (утром, в обед, вечером) в зависимости от его вида по рекомендациям производителя.

Так же протеин можно принимать за час до тренировки, если нет возможности вовремя принять пищу, но не ранее.

Аминокислоты так же принимаются по 2 порции (зависит от марки) порошка или таблетированной формы в день:

1. первую лучше принять сразу после сна, а через полчаса позавтракать;
2. а вторую – перед тренировкой за 30 минут.

Также в день отдыха БЦАА можно принимать в любое время, если появляется большой разрыв между приемами пищи для предупреждения катаболизма.

Можно ли принимать BCAA и протеин вместе и как правильно это делать

БЦАА и протеин принимать вместе можно, но не за один прием, а равномерно разбивая порции добавок в течение дня.

Можно употреблять в дни тренировок по следующей схеме:

• Утром после сна: одна порция БЦАА или сывороточный протеин на выбор.
• Перед тренировкой: одна порция БЦАА.
• После тренировки: сывороточный протеин.
• Вечером или на ночь можно принять комплексный протеин или казеин (если есть).

Заключение

В любом случае, обе добавки незаменимы для качественного набора мышц. Но стоит помнить, что аминокислоты и БЦАА – основной материал для роста мышц, они также присутствуют и в протеине (в разных пропорциях). Единственное, что многие нежелательные для спортсмена компоненты содержатся в протеиновом порошке, а в БЦАА их нет. Поэтому внимательно изучайте состав добавки и сопоставляйте со своими целями, возможно, при правильном и сбалансированном питании будет достаточно одних аминокислот.

А также узнайте, можно ли совмещать прием протеина и гейнера →

рекомбинантный белок hsaA | Флавин-зависимая монооксигеназа, субъединица оксигеназы HsaA (hsaA) Рекомбинантный белок-Q0S811.1

Q0S811.1

[Другие продукты] UniProt, первичный регистрационный номер

[Другие продукты] Молекулярный вес 41,868 Да NCBI Официальное полное имя Флавин-зависимая монооксигеназа, субъединица оксигеназы HsaA Название протеина UniProt Флавин-зависимая монооксигеназа, субъединица оксигеназы HsaA Имена белков синонимов UniProt 3-гидрокси-9,10-секоандроста-1,3,5 (10) -триен-9,17-дион-4-гидроксилаза, субъединица оксигеназы; 3-гидрокси-9,10-секоандроста-1,3,5 (10) -триен-9,17-дионмонооксигеназа Комментарии UniProt для hsaA Катализирует о-гидроксилирование 3-гидрокси-9,10-секоандроста-1,3,5 (10) -триен-9,17-диона (3-HSA) до 3,4-дигидрокси-9,10-секоандроста. -1,3,5 (10) -триен-9,17-дион (3,4-DHSA) в катаболизме холестерина. Меры предосторожности Все продукты MyBioSource предназначены для научных лабораторных исследований и не предназначены для диагностического, терапевтического, профилактического или in vivo использования. Совершая покупку, вы прямо заявляете и гарантируете MyBioSource, что вы будете надлежащим образом тестировать и использовать любые Продукты, приобретенные у MyBioSource, в соответствии с отраслевыми стандартами. MyBioSource и его авторизованные дистрибьюторы оставляют за собой право отказать в обработке любого заказа, если мы обоснованно полагаем, что предполагаемое использование будет выходить за рамки наших приемлемых руководящих принципов. Заявление об ограничении ответственности Несмотря на то, что были приложены все усилия для обеспечения точности информации, представленной в этом техническом описании, MyBioSource не несет ответственности за любые упущения или ошибки, содержащиеся в нем. MyBioSource оставляет за собой право вносить изменения в эту таблицу в любое время без предварительного уведомления. Заказчик обязан сообщать MyBioSource о проблемах с производительностью продукта в течение 30 дней с момента получения продукта. Пожалуйста, посетите нашу страницу с положениями и условиями для получения дополнительной информации. Продукты, связанные с рекомбинантным белком hsaA Пути, связанные с рекомбинантным белком hsaA

Получение трансгенных мышей со сверхэкспрессией hSAA в жировой ткани. A …

Context 1

… был вставлен в линеаризованный EcoRV pBluescript SK + (Stratagene, La Jolla, CA) перед последовательностью полиаденилирования SV40. Наконец, интрон BamHI-BglII гена b-глобина кролика был вставлен в сайт SmaI, ниже aP2-hSAA и выше сайта полиаденилирования.Фрагмент SacII-XhoI размером 7190 п.н. (рис. 1) микроинъектировали в оплодотворенные яйца C57BL / 6J с помощью инъекции пронуклеусов, и яйца имплантировали в яйцевод псевдобеременных реципиентов. Все рестрикционные ферменты были приобретены в New England Biolabs (Ипсвич, Массачусетс). Трансгенных мышей идентифицировали с помощью ПЦР с прямым и обратным праймерами 5 9 -CCAGGGAGAAC-CAAAGTTGA и 5 9 -CCCGAGCATGGAAGTATTTG соответственно. Эндогенный ген β-глобина коамплифицировали в качестве внутреннего контроля. Последующее скрещивание проводили против мышей C57BL / 6J (Charles River, Sulzfeld, Германия) для получения гетерозиготных SAA-трансгенных мышей.В экспериментах использовали самцов F2 или более поздних поколений. Животных отлучали от груди в возрасте 3 недель и содержали по 3–6 на клетку в помещении с регулируемой температурой (25 ° C) с 12-часовым циклом свет-темнота со свободным доступом к корму и воде. Начиная с возраста 13 недель, сопоставимых по возрасту животных дикого типа и трансгенных животных hSAA кормили либо нормальной пищей (NC), либо гранулированной диетой с высоким содержанием жира (HF) (60 ккал% жира; D12492, Research Diets, New Brunswick, NJ). В конце эксперимента мышей умерщвляли после 4-часового голодания.С помощью пункции сердца собирали кровь в пробирки с калиевым ЭДТА (Sarstedt, N mbrecht, Германия) от животных, подвергнутых ингаляционной анестезии Isofluran (Baxter, Kista, Швеция). Коричневую жировую ткань (BAT), эпидидимальную жировую ткань (eWAT), забрюшинную жировую ткань (rWAT), икроножную мышцу, сердце, печень, почки и селезенку препарировали, взвешивали, быстро замораживали в жидком азоте и хранили при температуре 280 ° C до получения РНК. добыча. Общую массу тела регистрировали в возрасте 11 недель и еженедельно в течение периода кормления HF или соответствующего NC.Анализ общего жира в организме выполняли с помощью двухэнергетической рентгеновской абсорбциометрии (DEXA) с использованием денситометра Lunar PIXImus II с программным обеспечением версии 2.10.041 (GE Healthcare, Waukesha, WI) после 17 недель диеты HF или NC. Во время анализа DEXA мышей анестезировали изофлураном. РНК из препарированных тканей получали с использованием липидного мини-набора RNeasy с гомогенизацией TissueLyser (Qiagen, Chatsworth, CA), а затем РНК подвергали обратной транскрипции с использованием набора High Capacity cDNA RT (Applied Biosystems, Foster City, CA).Анализ ПЦР в реальном времени выполняли с использованием смеси TaqMan Gene Expression Master Mix и кДНК, соответствующей 10 нг РНК на реакцию с ABI Prism 7900HT (Applied Biosystems). Были использованы следующие анализы экспрессии гена TaqMan; Hs00761940_s1 (SAA человека), Mm00441203_m1 (Saa3 мыши) и Mm00445878_m1 (Fabp4 мыши). Анализ Mm00725448_s1 использовали для обнаружения эндогенного эталонного транскрипта рибосомного белка большого размера, P0 (Rplp0; все реагенты были от Applied Biosystems). Стандартная кривая анализировалась для каждого анализа с последовательным разведением кДНК, синтезированной из объединенной РНК.Образцы и стандарты анализировали в трех экземплярах. После 16 недель диеты HF или NC, забору крови из хвостовой вены предшествовало 4-часовое голодание. Базальную глюкозу и инсулин измеряли с помощью глюкометра Accu-Check (Roche, Стокгольм, Швеция) и набора для иммуноферментного анализа с ферментным связыванием с инсулином мыши (Chrystal Chem Inc., Downers Grove, IL) соответственно. Пулы плазмы (n = 7–10 животных) из крови, взятой путем пункции сердца, подвергали гель-фильтрации с быстрой жидкостной хроматографией (FPLC) на колонке Superose 6 (10 / 300GL) (GE Pharmacia AKTA explorer) [31].ЛПВП от hSAA-трансгенных мышей и мышей дикого типа (n = 6 в каждой группе) выделяли ультрацентрифугированием, как описано ранее [32]. Триглицериды и холестерин измеряли во фракциях FPLC и в цельной плазме с использованием Infinity Cholesterol и Infinity Triglycerides (Triolab AB, Гетеборг, Швеция) с использованием многокомпонентного калибратора 1E65-04 (Abbott, Solna, Швеция) в качестве эталона. Белок hSAA измеряли в плазме трансгенных мышей hSAA, в пулах двух соседних фракций FPLC и в образцах ультрацентрифугирования с использованием набора Human SAA ELISA Kit (Biosource, Camarillo, CA).Белок SAA мыши (mSAA) измеряли в плазме с использованием набора Mouse SAA ELISA (Tridelta Development Ltd., Ко. Килдэр, Ирландия). Данные представлены как среднее 6 стандартное отклонение (SD), если не указано иное. Статистический анализ был выполнен с использованием SPSS (версия 16.0; SPSS; Чикаго, Иллинойс, США). Различия между группами оценивали с помощью U-критерия Манна-Уитни. Различия в кривых роста оценивали с помощью дисперсионного анализа с повторными измерениями (ANOVA). Непараметрические корреляции проводились с использованием критерия ранговой корреляции Спирмена.Значение p менее 0,05 считалось статистически значимым. Конструкцию, содержащую мышиную область промотора / энхансера aP2, использовали для создания модели мыши со специфической экспрессией hSAA в жировой ткани (рис. 1). Из инъекций пронуклеусов были получены три трансгенных основателя и установлен один трансгенный штамм. Трансгенные животные были жизнеспособными, имели нормальный размер помета и не имели видимого фенотипа. Анализ ПЦР в реальном времени подтвердил, что трансгенная конструкция специфически экспрессировалась в жировой ткани (фиг. 2A) и что транскрипт hSAA не обнаруживался у животных дикого типа, получавших рацион NC или HF (n = 4, соответственно; данные не показаны).В мышцах и сердце уровни экспрессии hSAA были чуть выше нижнего предела обнаружения, и, как и ожидалось, экспрессия hSAA не определялась в тканях животных дикого типа. Не было никакого влияния кормления HF на экспрессию гена hSAA в eWAT или в rWAT по сравнению с образцами от животных, получавших NC (рис. 2A). Не было разницы в экспрессии Fabp4 (aP2) у трансгенных мышей по сравнению с мышами дикого типа (фигура 2B) в eWAT, но экспрессия была значительно ниже в HF по сравнению с животными, получавшими hSAA NC (фигура 2B; p = 0.011). У животных, которых кормили HF, экспрессия Saa3 в eWAT была снижена в hSAA по сравнению с животными дикого типа (фигура 2C, p = 0,028). Однако у животных, получавших NC, экспрессия Saa3 в жировой ткани не изменилась. В возрасте 11 недель масса тела мышей-самцов hSAA (25,0 ± 2,1 г, n = 18) была немного ниже по сравнению с самцами мышей дикого типа (26,3 ± 2,0 г, n = 19; p = 0,046). Группам животных вводили HF-диету, напоминающую западную диету. Даже несмотря на то, что была начальная разница в массе тела между hSAA и животными дикого типа, не было различий в приросте массы между hSAA и мышами дикого типа, получавшими NC или при введении HF-диеты (фигура 2D).Общее содержание жира в организме измеряли с помощью DEXA после 17 недель диеты NC или HF. Общее количество жира в организме было сходным у мышей-самцов hSAA и дикого типа на одной и той же диете (данные не показаны). В соответствии с этим выводом, не было серьезных расхождений в размерах депо жировой ткани (Таблица 1). В конце исследования животные с hSAA, получавшие диету NC, имели такие же размеры депо жировой ткани, что и животные дикого типа, как по абсолютным значениям, так и по отношению к массе тела (Таблица 1). Трансгенные животные, получавшие hSAA HF, показали значительно увеличенный размер депо eWAT как по абсолютной массе (p = 0.019) и при выражении в процентах от массы тела (p = 0,034) по сравнению с мышами дикого типа, получавшими диету с HF. Те же животные не показали изменений в массе rWAT или BAT. У трансгенных животных с hSAA, получавших диету с HF, была снижена абсолютная масса почек и сердца (p = 0,023 и p = 0,049, соответственно). Однако в отношении веса тела эти значения были потеряны. Вес почек и сердца животных, получавших нормальную пищу, был одинаковым у животных дикого типа и животных с hSAA. Кроме того, животные с hSAA на HF, но не на NC, имели значительно меньшую массу селезенки по сравнению с мышами дикого типа как по абсолютной массе, так и по отношению к массе тела (p = 0.001 для обоих тестов). Вес икроножных мышц, печени или мозга был сходным у животных дикого типа и животных с hSAA, получавших NC или HF диету (данные не показаны). ELISA, специфичный для SAA человека, использовали для анализа концентраций hSAA в плазме трансгенных животных hSAA. Мы обнаружили, что белок hSAA присутствовал в плазме от животных NC (n = 7) и HF (n = 10), получавших hSAA, тогда как hSAA не обнаруживался в плазме от животных дикого типа (n = 8). Кроме того, значительно повышенные уровни hSAA были обнаружены в плазме от животных, получавших HF, по сравнению с животными, получавшими hSAA с NC (p = 0.0001, рисунок 3A). Концентрации мышиного SAA в плазме измеряли с помощью ELISA, который не показал перекрестной реактивности по отношению к белку hSAA (данные не показаны). Концентрация mSAA в трех образцах плазмы (от одной hSAA и двух мышей дикого типа) от животных, получавших HF, была выше предела обнаружения анализа. Эти образцы не были включены в анализ mSAA. Уровни mSAA в плазме были увеличены при HF по сравнению с животными, получавшими NC (p, 0,0001; фигура 3B). Мы не обнаружили разницы в уровнях mSAA в плазме между hSAA и мышами дикого типа (рис. 3B).Общее количество холестерина и триглицеридов в плазме также измеряли в отдельных образцах плазмы, но уровни не изменились между hSAA и животными дикого типа в обеих группах, получавших NC (холестерин: 3,0 ± 0,2 и 3,0 ± 0,4 ммоль / л; триглицериды: 0,7 ± 0,08 и 0,7 ± 0,09 ммоль / л для мышей дикого типа и мышей hSAA, соответственно) и группы, получавшей HF (холестерин: 5,5 ± 0,9 и 5,3 ± 1,0 ммоль / л; триглицериды: 0,52 ± 0,13 и 0,55 ± 0,09 ммоль / л для дикого типа. и мыши hSAA соответственно). Глюкозу и инсулин в крови измеряли после 4-часового голодания у животных, получавших 16-недельную диету с HF, но уровни глюкозы и инсулина не различались у животных дикого типа и животных с hSAA (глюкоза: 12.9 6 …

Контекст 2

… являются основными продуцентами SAA у лиц с ожирением [10,11]. Экспрессия гена SAA повышена в гипертрофических адипоцитах человека [12], клетках, которые, как известно, связаны с ожирением и инсулинорезистентностью [13]. Кроме того, уровни SAA в сыворотке коррелируют с показателями ожирения и снижаются во время снижения веса, вызванного диетой [10]. Кроме того, было показано, что высвобождение SAA из жировой ткани человека in vitro коррелирует с экспрессией гена SAA [2].Таким образом, вероятно, что у людей увеличенная жировая масса при ожирении существенно влияет на уровни SAA в кровообращении. Предыдущие исследования на людях показали, что SAA может иметь различные эффекты, включая стимулирование продукции провоспалительных цитокинов [2], индукцию липолиза [2,14] и усиление химиотаксиса воспалительных клеток [15,16]. Более того, SAA может удалять избыток холестерина из участков воспаления (обзор [17]), и было высказано предположение, что он играет роль в оттоке холестерина в жировую ткань [18].SAA может действовать как аполипопротеин, и большая часть SAA в крови связана с липопротеинами высокой плотности (HDL). SAA вызывает вытеснение ApoA-I, преобладающего аполипопротеина ЛПВП, in vitro [19], что может изменять свойства ЛПВП проатерогенным образом. Протеогликаны являются компонентами внеклеточного матрикса и могут быть важны для вредного удержания липопротеинов. SAA содержит протеогликановые связывающие домены [20] и, как предполагается, опосредует удержание проатеросклеротических липидов и липопротеинов в стенке сосуда.In vitro большее количество SAA на частицах HDL увеличивает связывание HDL с протеогликанами [21], и эта идея дополнительно подтверждается совместной локализацией SAA с ApoA-I в атеросклеротических поражениях у мышей [21,22]. Интересно, что недавняя публикация показала, что SAA, но не CRP, обладает способностью напрямую способствовать синтезу протеогликанов в сосудах проатерогенным образом [23], предполагая, что SAA может быть прямой связью между воспалением низкой степени в жировой ткани и сердечно-сосудистой системой. заболевание у лиц с ожирением.Белок SAA транскрибируется из двух гомологичных генов SAA1 / SAA2 у людей и из Saa1 / Saa2 у мышей. Однако в семействе генов SAA также есть видовые различия. У мышей Saa3 экспрессируется внепеченочно, тогда как SAA3 у людей является псевдогеном. Следовательно, у мышей гены Saa1 / Saa2 и Saa3 экспрессируются в жировой ткани, тогда как у людей транскрибируются только гены SAA1 / SAA2. Также было показано, что только экспрессия Saa3 увеличивается после HF диеты у мышей [24]. Несмотря на то, что у мышей с ожирением также наблюдается повышенный уровень SAA в сыворотке, недавно сообщалось об отсутствии SAA3 в сыворотке [25], что указывает на то, что у мышей с ожирением SAA в кровотоке имеет печеночное происхождение.Зрелый белок, кодируемый SAA1 / SAA2, является высококонсервативным у мыши и человека [26]. Напротив, белки SAA1 / SAA2 и SAA3 мыши являются отдельными белками с гомологией последовательностей только 63–65% [26]. Из-за этих видовых различий сверхэкспрессия человеческого SAA1, вероятно, будет наиболее подходящей моделью при решении вопросов, связанных с экспрессией SAA в жировой ткани при ожирении человека. Другие исследовали эффекты человеческого белка SAA (hSAA) у мышей, используя сверхэкспрессию аденовируса [23,27,28,29].Однако этот метод приводит только к краткосрочному производству hSAA в печени. Таким образом, эти исследования не имитируют хроническое увеличение SAA, происходящего из жировой ткани, у людей с ожирением. Поэтому мы разработали мышиную модель, в которой hSAA сверхэкспрессируется в жировой ткани, чтобы имитировать ситуацию с ожирением у человека. Следовательно, эта модель позволяет изучать системные и местные эффекты SAA, происходящей из адипоцитов, и предоставляет инструмент, который можно использовать для определения роли SAA, происходящей из жировой ткани, в развитии метаболических заболеваний.Все манипуляции с мышами выполнялись с использованием протоколов, утвержденных местным комитетом по этике исследований на животных при Апелляционном административном суде в Гетеборге, Швеция, номера одобрения 201-2006 и 281-2008. Трансгенных мышей-основателей получали на фоне C57BL / 6J. КДНК человеческого SAA1 (hSAA) клонировали в вектор pCR 2.1 (Invitrogen, Carlsbad, CA) и проверяли секвенированием. Расщепленный SmaI-EcoRV фрагмент, содержащий hSAA1, лигировали в линеаризованный вектор pBluescript SK II + Sma1 (Stratagene, La Jolla, CA) ниже промотора связывающего жирные кислоты белка 4 (aP2) (любезно предоставленного доктором Dr.Брюс Спигельман) [30]. Фрагмент SmaI-BamHI, содержащий последовательность полиаденилирования SV40 из вектора pSI (Promega, Madison, WI), лигировали в линеаризованный вектор pBS SK + BamHI-SmaI. Фрагмент Sma1-HincII, содержащий aP2-hSAA1, вставляли в линеаризованный EcoRV pBluescript SK + (Stratagene, La Jolla, CA) перед последовательностью полиаденилирования SV40. Наконец, интрон BamHI-BglII гена b-глобина кролика был вставлен в сайт SmaI, ниже aP2-hSAA и выше сайта полиаденилирования.Фрагмент SacII-XhoI размером 7190 п.н. (рис. 1) микроинъектировали в оплодотворенные яйца C57BL / 6J с помощью инъекции пронуклеусов, и яйца имплантировали в яйцевод псевдобеременных реципиентов. Все рестрикционные ферменты были приобретены в New England Biolabs (Ипсвич, Массачусетс). Трансгенных мышей идентифицировали с помощью ПЦР с прямым и обратным праймерами 5 9 -CCAGGGAGAAC-CAAAGTTGA и 5 9 -CCCGAGCATGGAAGTATTTG соответственно. Эндогенный ген β-глобина коамплифицировали в качестве внутреннего контроля. Последующее скрещивание проводили против мышей C57BL / 6J (Charles River, Sulzfeld, Германия) для получения гетерозиготных SAA-трансгенных мышей.В экспериментах использовали самцов F2 или более поздних поколений. Животных отлучали от груди в возрасте 3 недель и содержали по 3–6 на клетку в помещении с регулируемой температурой (25 ° C) с 12-часовым циклом свет-темнота со свободным доступом к корму и воде. Начиная с возраста 13 недель, сопоставимых по возрасту животных дикого типа и трансгенных животных hSAA кормили либо нормальной пищей (NC), либо гранулированной диетой с высоким содержанием жира (HF) (60 ккал% жира; D12492, Research Diets, New Brunswick, NJ). В конце эксперимента мышей умерщвляли после 4-часового голодания.С помощью пункции сердца собирали кровь в пробирки с калиевым ЭДТА (Sarstedt, N mbrecht, Германия) от животных, подвергнутых ингаляционной анестезии Isofluran (Baxter, Kista, Швеция). Коричневую жировую ткань (BAT), эпидидимальную жировую ткань (eWAT), забрюшинную жировую ткань (rWAT), икроножную мышцу, сердце, печень, почки и селезенку препарировали, взвешивали, быстро замораживали в жидком азоте и хранили при температуре 280 ° C до получения РНК. добыча. Общую массу тела регистрировали в возрасте 11 недель и еженедельно в течение периода кормления HF или соответствующего NC.Анализ общего жира в организме выполняли с помощью двухэнергетической рентгеновской абсорбциометрии (DEXA) с использованием денситометра Lunar PIXImus II с программным обеспечением версии 2.10.041 (GE Healthcare, Waukesha, WI) после 17 недель диеты HF или NC. Во время анализа DEXA мышей анестезировали изофлураном. РНК из препарированных тканей получали с использованием липидного мини-набора RNeasy с гомогенизацией TissueLyser (Qiagen, Chatsworth, CA), а затем РНК подвергали обратной транскрипции с использованием набора High Capacity cDNA RT (Applied Biosystems, Foster City, CA).Анализ ПЦР в реальном времени выполняли с использованием смеси TaqMan Gene Expression Master Mix и кДНК, соответствующей 10 нг РНК на реакцию с ABI Prism 7900HT (Applied Biosystems). Были использованы следующие анализы экспрессии гена TaqMan; Hs00761940_s1 (SAA человека), Mm00441203_m1 (Saa3 мыши) и Mm00445878_m1 (Fabp4 мыши). Анализ Mm00725448_s1 использовали для обнаружения эндогенного эталонного транскрипта рибосомного белка большого размера, P0 (Rplp0; все реагенты были от Applied Biosystems). Стандартная кривая анализировалась для каждого анализа с последовательным разведением кДНК, синтезированной из объединенной РНК.Образцы и стандарты анализировали в трех экземплярах. После 16 недель диеты HF или NC, забору крови из хвостовой вены предшествовало 4-часовое голодание. Базальную глюкозу и инсулин измеряли с помощью глюкометра Accu-Check (Roche, Стокгольм, Швеция) и набора для иммуноферментного анализа с ферментным связыванием с инсулином мыши (Chrystal Chem Inc., Downers Grove, IL) соответственно. Пулы плазмы (n = 7–10 животных) из крови, взятой путем пункции сердца, подвергали гель-фильтрации с быстрой жидкостной хроматографией (FPLC) на колонке Superose 6 (10 / 300GL) (GE Pharmacia AKTA explorer) [31].ЛПВП от hSAA-трансгенных мышей и мышей дикого типа (n = 6 в каждой группе) выделяли ультрацентрифугированием, как описано ранее [32]. Триглицериды и холестерин измеряли во фракциях FPLC и в цельной плазме с использованием Infinity Cholesterol и Infinity Triglycerides (Triolab AB, Гетеборг, Швеция) с использованием многокомпонентного калибратора 1E65-04 (Abbott, Solna, Швеция) в качестве эталона. Белок hSAA измеряли в плазме трансгенных мышей hSAA, в пулах двух соседних фракций FPLC и в образцах ультрацентрифугирования с использованием набора Human SAA ELISA Kit (Biosource, Camarillo, CA).Белок SAA мыши (mSAA) измеряли в плазме с использованием набора Mouse SAA ELISA (Tridelta Development Ltd., Ко. Килдэр, Ирландия). Данные представлены как среднее 6 стандартное отклонение (SD), если не указано иное. Статистический анализ был выполнен с использованием SPSS (версия 16.0; SPSS; Чикаго, Иллинойс, США). Различия между группами оценивали с помощью U-критерия Манна-Уитни. Различия в кривых роста оценивали с помощью дисперсионного анализа с повторными измерениями (ANOVA). Непараметрические корреляции проводились с использованием критерия ранговой корреляции Спирмена.Значение p менее 0,05 считалось статистически значимым. Конструкцию, содержащую мышиную область промотора / энхансера aP2, использовали для создания модели мыши со специфической экспрессией hSAA в жировой ткани (рис. 1). Из инъекций пронуклеусов были получены три трансгенных основателя и установлен один трансгенный штамм. Трансгенные животные были жизнеспособными, имели нормальный размер помета и не имели видимого фенотипа. Анализ ПЦР в реальном времени подтвердил, что трансгенная конструкция специфически экспрессировалась в жировой ткани…

Создание модели трансгенных мышей, специфически экспрессирующих амилоид А сыворотки человека в жировой ткани

Abstract

Ожирение и сопутствующие заболевания ожирения связаны с воспалением слабой степени и повышенными уровнями в сыворотке крови белков острой фазы, включая сывороточный амилоид A (SAA). В неострой фазе у людей адипоциты являются основными продуцентами SAA, но функция SAA, полученная из адипоцитов, неизвестна. Чтобы прояснить роль SAA, происходящего из адипоцитов, была создана модель трансгенных мышей, экспрессирующих человеческий SAA1 (hSAA) в адипоцитах.Экспрессию hSAA анализировали с помощью ПЦР в реальном времени. Самцов животных вводили в рацион с высоким содержанием жиров (HF). Образцы плазмы подвергали разделению с помощью быстрой жидкостной хроматографии белков (FPLC). Содержание hSAA, холестерина и триглицеридов измеряли в плазме и во фракциях FPLC. ПЦР-анализ в реальном времени подтвердил экспрессию гена hSAA, специфичного для жировой ткани. Более того, HF-диета не влияла на экспрессию гена hSAA. Однако уровни hSAA в плазме у животных, получавших HF (37,7 ± 4,0 мкг / мл, n = 7), были повышены по сравнению с таковыми у животных, получавших нормальную пищу (4.8 ± 0,5 мкг / мл, n = 10; p <0,001), а уровни в плазме в двух группах были в тех же диапазонах, что и у людей с ожирением и худых, соответственно. В образцах плазмы, разделенных методом FPLC, концентрация hSAA достигла пика во фракциях, содержащих липопротеины высокой плотности (HDL). Кроме того, распределение холестерина по различным субфракциям липопротеинов, оцененное с помощью анализа FPLC, было сходным в двух экспериментальных группах. Установленная модель трансгенных мышей демонстрирует, что hSAA, продуцируемый жировой тканью, попадает в кровоток, что приводит к повышенным уровням hSAA в плазме.Эта новая модель позволит провести дальнейшие исследования метаболических эффектов SAA, полученных из жировой ткани.

Образец цитирования: Olsson M, Ahlin S, Olsson B, Svensson P-A, Ståhlman M, Borén J, et al. (2011) Создание модели трансгенных мышей, специфически экспрессирующих амилоид А сыворотки человека в жировой ткани. PLoS ONE 6 (5): e19609. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0019609

Редактор: Гийом Дальмассо, Университет Эмори, Соединенные Штаты Америки

Поступила: 3 декабря 2010 г .; Одобрена: 12 апреля 2011 г .; Опубликовано: 18 мая 2011 г.

Авторские права: © 2011 Olsson et al.Это статья в открытом доступе, распространяемая в соответствии с условиями лицензии Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания автора и источника.

Финансирование: Эта работа была поддержана грантами Шведского исследовательского совета (K2008-65p-20758-01-4 и K2010-55X-11285-13), федерального правительства Швеции в соответствии с соглашением LUA / ALF, Sahlgrenska Academy, программа VINNOVA-VINNMER, Фонды Жанссона, Фонд Оке Виберга, Королевское физиографическое общество в Лунде (Нильссон-Эле), Фонд Эмелле и Шведский фонд знаний в рамках промышленной программы PhD в области медицинской биоинформатики в Корпоративных альянсах, Каролинская Institutet.Финансирующие организации не играли никакой роли в дизайне исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

Конкурирующие интересы: Авторы заявили об отсутствии конкурирующих интересов.

Введение

Ожирение, особенно центральное ожирение, является основным фактором риска сердечно-сосудистых заболеваний [1]. Жировая ткань производит множество адипокинов, которые действуют как локально в жировой ткани, так и системно при попадании в кровоток.Ожирение связано с воспалением слабой степени с незначительно повышенным уровнем сывороточных белков острой фазы, включая C-реактивный белок (CRP) и сывороточный амилоид A (SAA) [2], [3]. Повышенные уровни SAA в сыворотке связаны с инсулинорезистентностью, диабетом 2 типа и могут иметь прогностическое значение для сердечно-сосудистых заболеваний [4], [5], [6], [7], [8].

В острой фазе ответа SAA продуцируется печенью, и ее сывороточные уровни могут увеличиваться в тысячу раз, но функция SAA плохо изучена.Было обнаружено внепеченочное производство SAA [9], и мы и другие ранее сообщали, что в неострой фазе адипоциты являются основными продуцентами SAA у лиц с ожирением [10], [11]. Экспрессия гена SAA повышена в гипертрофических адипоцитах человека [12], клетках, которые, как известно, связаны с ожирением и инсулинорезистентностью [13]. Кроме того, уровни SAA в сыворотке коррелируют с показателями ожирения и снижаются во время снижения веса, вызванного диетой [10]. Кроме того, было показано, что высвобождение SAA из жировой ткани человека in vitro коррелирует с экспрессией гена SAA [2].Таким образом, вероятно, что у людей увеличенная жировая масса при ожирении существенно влияет на уровни SAA в кровообращении.

Предыдущие исследования на людях показали, что SAA может иметь различные эффекты, включая стимулирование продукции провоспалительных цитокинов [2], индукцию липолиза [2], [14] и увеличение хемотаксиса воспалительных клеток [15], [16]. Более того, SAA может удалять избыток холестерина из участков воспаления (обзор [17]), и было высказано предположение, что он играет роль в оттоке холестерина в жировую ткань [18].SAA может действовать как аполипопротеин, и большая часть SAA в крови связана с липопротеинами высокой плотности (HDL). SAA вызывает вытеснение ApoA-I, преобладающего аполипопротеина HDL, in vitro [19], что может изменять свойства HDL проатерогенным образом. Протеогликаны являются компонентами внеклеточного матрикса и могут быть важны для вредного удержания липопротеинов. SAA содержит протеогликановые связывающие домены [20] и, как предполагается, опосредует удержание проатеросклеротических липидов и липопротеинов в стенке сосуда. In vitro , более высокое количество SAA на частицах HDL увеличивает связывание HDL с протеогликанами [21], и эта идея дополнительно подтверждается совместной локализацией SAA с ApoA-I в атеросклеротических поражениях у мышей [21], [21]. 22]. Интересно, что недавняя публикация показала, что SAA, но не CRP, обладает способностью напрямую способствовать синтезу протеогликанов в сосудах проатерогенным образом [23], предполагая, что SAA может быть прямой связью между воспалением низкой степени в жировой ткани и сердечно-сосудистой системой. заболевание у лиц с ожирением.

Белок SAA транскрибируется из двух гомологичных генов SAA1 / SAA2 у людей и из Saa1 / Saa2 у мышей. Однако в семействе генов SAA также есть видовые различия. У мышей Saa3 экспрессируется внепеченочно, тогда как SAA3 у людей является псевдогеном. Следовательно, у мышей гены Saa1 / Saa2 и Saa3 экспрессируются в жировой ткани, тогда как у людей транскрибируются только гены SAA1 / SAA2. Также было показано, что только экспрессия Saa3 увеличивается после HF диеты у мышей [24].Несмотря на то, что у мышей с ожирением также наблюдается повышенный уровень SAA в сыворотке, недавно сообщалось об отсутствии SAA3 в сыворотке [25], что указывает на то, что у мышей с ожирением SAA в кровотоке имеет печеночное происхождение.

Зрелый белок, кодируемый SAA1 / SAA2, является высококонсервативным у мыши и человека [26]. Напротив, белки SAA1 / SAA2 и SAA3 мыши являются отдельными белками с гомологией последовательностей только 63–65% [26]. Из-за этих видовых различий сверхэкспрессия человеческого SAA1, вероятно, будет наиболее подходящей моделью при решении вопросов, связанных с экспрессией SAA в жировой ткани при ожирении человека.Другие исследовали эффекты человеческого белка SAA (hSAA) у мышей, используя сверхэкспрессию аденовируса [23], [27], [28], [29]. Однако этот метод приводит только к краткосрочному производству hSAA в печени. Таким образом, эти исследования не имитируют хроническое увеличение SAA, происходящего из жировой ткани, у людей с ожирением. Поэтому мы разработали мышиную модель, в которой hSAA сверхэкспрессируется в жировой ткани, чтобы имитировать ситуацию с ожирением у человека. Следовательно, эта модель позволяет изучать системные и местные эффекты SAA, происходящей из адипоцитов, и предоставляет инструмент, который можно использовать для определения роли SAA, происходящей из жировой ткани, в развитии метаболических заболеваний.

Методы

Заявление об этике

Все манипуляции с мышами выполнялись с использованием протоколов, утвержденных местным комитетом по этике исследований на животных при Апелляционном административном суде в Гетеборге, Швеция, номера одобрения 201-2006 и 281-2008.

Животные

трансгенных мышей-основателей получали на фоне C57BL / 6J. КДНК человеческого SAA1 (hSAA) клонировали в вектор pCR 2.1 (Invitrogen, Carlsbad, CA) и проверяли секвенированием.Расщепленный SmaI-EcoRV фрагмент, содержащий hSAA1, лигировали в линеаризованный Sma1 вектор pBluescript SK II + (Stratagene, La Jolla, CA) ниже промотора связывающего жирные кислоты белка 4 (aP2) (любезно предоставленного доктором Брюсом Спигельманом) [30]. Фрагмент SmaI-BamHI, содержащий последовательность полиаденилирования SV40 из вектора pSI (Promega, Madison, WI), лигировали в линеаризованный вектор pBS SK + BamHI-SmaI. Фрагмент Sma1-HincII, содержащий aP2-hSAA1, вставляли в линеаризованный EcoRV pBluescript SK + (Stratagene, La Jolla, CA) перед последовательностью полиаденилирования SV40.Наконец, интрон BamHI-BglII гена β-глобина кролика был вставлен в сайт SmaI, ниже aP2-hSAA и выше сайта полиаденилирования. Фрагмент SacII-XhoI размером 7190 п.н. (рис. 1) микроинъектировали в оплодотворенные яйцеклетки C57BL / 6J с помощью инъекции пронуклеусов, и яйца имплантировали в яйцевод псевдобеременных реципиентов. Все рестрикционные ферменты были приобретены в New England Biolabs (Ипсвич, Массачусетс). Трансгенных мышей идентифицировали с помощью ПЦР с прямым и обратным праймерами 5′-CCAGGGAGAACCAAAGTTGA и 5′-CCCGAGCATGGAAGTATTTG соответственно.Эндогенный ген β-глобина коамплифицировали в качестве внутреннего контроля.

Рисунок 1. Получение трансгенных мышей, сверхэкспрессирующих hSAA в жировой ткани.

Схематическое изображение слитого гена промотор aP2-hSAA. КДНК SAA1 человека лигировали с промотором / энхансером aP2, как описано в разделе «Методы». Пунктирный промотор aP2 коробки, заштрихованный бокс, интрон β-глобина кролика, серый ящик , сигнал полиаденилирования. Расщепление рестрикционным ферментом ферментами XhoI и SacII генерировало фрагменты 7.2 килобазей, которые использовались для инъекций пронуклеусов. Расположение праймеров для генотипирования указано стрелками.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0019609.g001

Последующее скрещивание было выполнено против мышей C57BL / 6J (Charles River, Sulzfeld, Германия) для получения гетерозиготных SAA-трансгенных мышей. В экспериментах использовали самцов F2 или более поздних поколений. Животных отлучили от груди в возрасте 3 недель и поместили по 3–6 на клетку в помещении с контролируемой температурой (25 ° C) с 12-часовым циклом свет-темнота со свободным доступом к корму и воде.Начиная с возраста 13 недель, сопоставимых по возрасту животных дикого типа и трансгенных животных hSAA кормили либо нормальной пищей (NC), либо гранулированной диетой с высоким содержанием жира (HF) (60 ккал% жира; D12492, Research Diets, New Brunswick, NJ). В конце эксперимента мышей умерщвляли после 4-часового голодания. С помощью пункции сердца собирали кровь в пробирки с калиевым ЭДТА (Sarstedt, Nümbrecht, Германия) от животных, подвергнутых ингаляционной анестезии Isofluran (Baxter, Kista, Швеция). Коричневая жировая ткань (BAT), эпидидимальная жировая ткань (eWAT), забрюшинная жировая ткань (rWAT), икроножная мышца, сердце, печень, почки и селезенка были рассечены, взвешены, быстро заморожены в жидком азоте и хранятся при -80 ° C до Извлечение РНК.

Состав тела

Общую массу тела регистрировали в возрасте 11 недель и еженедельно в течение периода кормления HF или соответствующего NC. Анализ общего жира в организме выполняли с помощью двухэнергетической рентгеновской абсорбциометрии (DEXA) с использованием денситометра Lunar PIXImus II с программным обеспечением версии 2.10.041 (GE Healthcare, Waukesha, WI) после 17 недель диеты HF или NC. Во время анализа DEXA мышей анестезировали изофлураном.

Подготовка РНК и анализ экспрессии генов

РНК из рассеченных тканей получали с использованием липидного мини-набора RNeasy с гомогенизацией TissueLyser (Qiagen, Chatsworth, CA), а затем РНК подвергали обратной транскрипции с использованием набора High Capacity cDNA RT (Applied Biosystems, Foster City, CA).Анализ ПЦР в реальном времени выполняли с использованием смеси TaqMan Gene Expression Master Mix и кДНК, соответствующей 10 нг РНК на реакцию с ABI Prism 7900HT (Applied Biosystems). Были использованы следующие анализы экспрессии гена TaqMan; Hs00761940_s1 (SAA человека), Mm00441203_m1 (Saa3 мыши) и Mm00445878_m1 (Fabp4 мыши). Анализ Mm00725448_s1 использовали для обнаружения эндогенного эталонного транскрипта рибосомного белка большого размера, P0 (Rplp0; все реагенты были от Applied Biosystems). Стандартная кривая анализировалась для каждого анализа с последовательным разведением кДНК, синтезированной из объединенной РНК.Образцы и стандарты анализировали в трех экземплярах.

Измерения крови

После 16 недель диеты HF или NC, забору крови из хвостовой вены предшествовало 4-часовое голодание. Базальную глюкозу и инсулин измеряли с помощью глюкометра Accu-Check (Roche, Стокгольм, Швеция) и набора для иммуноферментного анализа сверхчувствительного мышиного инсулина (ELISA) (Chrystal Chem Inc., Downers Grove, IL) соответственно. Пулы плазмы (n = 7–10 животных) из крови, взятой путем пункции сердца, подвергали гель-фильтрации с быстрой жидкостной хроматографией (FPLC) на колонке Superose 6 (10 / 300GL) (GE Pharmacia AKTA explorer) [31].ЛПВП от hSAA-трансгенных мышей и мышей дикого типа (n = 6 в каждой группе) выделяли ультрацентрифугированием, как описано ранее [32]. Триглицериды и холестерин измеряли во фракциях FPLC и в цельной плазме с использованием Infinity Cholesterol и Infinity Triglycerides (Triolab AB, Гетеборг, Швеция) с многокомпонентным калибратором 1E65-04 (Abbott, Solna, Швеция), используемым в качестве эталона. Белок hSAA измеряли в плазме трансгенных мышей hSAA, в пулах двух соседних фракций FPLC и в образцах ультрацентрифугирования с использованием набора Human SAA ELISA Kit (Biosource, Camarillo, CA).Белок SAA мыши (mSAA) измеряли в плазме с использованием набора Mouse SAA ELISA (Tridelta Development Ltd., Ко. Килдэр, Ирландия).

Статистический анализ

Данные представлены как среднее значение ± стандартное отклонение (SD), если не указано иное. Статистический анализ был выполнен с использованием SPSS (версия 16.0; SPSS; Чикаго, Иллинойс, США). Различия между группами оценивали с помощью U-критерия Манна-Уитни. Различия в кривых роста оценивали с помощью дисперсионного анализа с повторными измерениями (ANOVA).Непараметрические корреляции проводились с использованием критерия ранговой корреляции Спирмена. Значение p менее 0,05 считалось статистически значимым.

Результаты

Анализ экспрессии мРНК у мышей со сверхэкспрессией hSAA в жировой ткани

Конструкцию, содержащую промоторную / энхансерную область aP2 мыши, использовали для создания модели на мышах со специфической экспрессией hSAA в жировой ткани (фиг. 1). Из инъекций пронуклеусов были получены три трансгенных основателя и установлен один трансгенный штамм.Трансгенные животные были жизнеспособными, имели нормальный размер помета и не имели видимого фенотипа. Анализ ПЦР в реальном времени подтвердил, что трансгенная конструкция специфически экспрессировалась в жировой ткани (фиг. 2A) и что транскрипт hSAA не обнаруживался у животных дикого типа, получавших рацион NC или HF (n = 4, соответственно; данные не показаны). В мышцах и сердце уровни экспрессии hSAA были чуть выше нижнего предела обнаружения, и, как и ожидалось, экспрессия hSAA не определялась в тканях животных дикого типа.Не было никакого влияния кормления HF на экспрессию гена hSAA в eWAT или в rWAT по сравнению с образцами от животных, получавших NC (рис. 2A). Не было различий в экспрессии Fabp4 (aP2) у трансгенных мышей по сравнению с мышами дикого типа (фигура 2B) в eWAT, но экспрессия была значительно ниже в HF по сравнению с животными, получавшими hSAA NC (фигура 2B; p = 0,011). У животных, которых кормили HF, экспрессия Saa3 в eWAT была снижена в hSAA по сравнению с животными дикого типа (фиг. 2C, p = 0,028). Однако у животных, получавших NC, экспрессия Saa3 в жировой ткани не изменилась.

Рисунок 2. Анализы на трансгенных мышах-самцах hSAA: экспрессия генов и рост животных.

Экспрессия гена

( A ) hSAA в различных тканях, включая эпидидимальную белую жировую ткань (eWAT), забрюшинную белую жировую ткань (rWAT) и коричневую жировую ткань (BAT), была измерена у трансгенных животных hSAA (n = 7), получавших NC-диету. . Экспрессию гена hSAA также измеряли в eWAT и rWAT у мышей hSAA (n = 10) после 18 недель приема HF-диеты. Экспрессия была нормализована до Rplp0. ( B ) и ( C ) Экспрессия генов Fabp4 и Saa3 в eWAT (n = 7-10 самцов в каждой группе), соответственно.Экспрессия была нормализована до Rplp0. ( D ) Кривые роста трансгенных животных дикого типа и hSAA, получавших NC (пунктирная линия) или HF (сплошная линия) диету в течение 18 недель. Открытые кружки — мыши дикого типа; закрашенные квадраты мыши hSAA (n = 7–10 на группу) *, p <0,05. Значения даны как среднее ± стандартная ошибка среднего.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0019609.g002

Анализ роста и состава тела трансгенных животных hSAA

В возрасте 11 недель масса тела самцов мышей hSAA (25.0 ± 2,1 г, n = 18) были несколько ниже по сравнению с самцами мышей дикого типа (26,3 ± 2,0 г, n = 19; p = 0,046). Группам животных вводили HF-диету, напоминающую западную диету. Даже несмотря на то, что была начальная разница в массе тела между hSAA и животными дикого типа, не было различий в приросте массы между hSAA и мышами дикого типа, получавшими NC или при введении HF-диеты (фигура 2D).

Общее содержание жира в организме измеряли с помощью DEXA после 17 недель диеты NC или HF. Общее количество жира в организме было сходным у мышей-самцов hSAA и дикого типа на одной и той же диете (данные не показаны).В соответствии с этим выводом, не было серьезных расхождений в размерах депо жировой ткани (Таблица 1). В конце исследования животные с hSAA, получавшие диету NC, имели такие же размеры депо жировой ткани, что и животные дикого типа, как по абсолютным значениям, так и по отношению к массе тела (Таблица 1). Трансгенные животные, получавшие hSAA HF, демонстрировали значительно увеличенный размер депо eWAT как по абсолютной массе (p = 0,019), так и при выражении в процентах от веса тела (p = 0,034) по сравнению с мышами дикого типа, получавшими HF-диету. Те же животные не показали изменений в массе rWAT или BAT.

Трансгенные животные с hSAA, получавшие HF-диету, имели пониженную абсолютную массу почек и сердца (p = 0,023 и p = 0,049, соответственно). Однако в отношении веса тела эти значения были потеряны. Вес почек и сердца животных, получавших нормальную пищу, был одинаковым у животных дикого типа и животных с hSAA. Кроме того, животные с hSAA на HF, но не на NC, имели значительно меньшую массу селезенки по сравнению с мышами дикого типа как по абсолютной массе, так и по отношению к массе тела (p = 0,001 для обоих тестов).Вес икроножных мышц, печени или мозга был сходным у животных дикого типа и животных с hSAA, получавших NC или HF диету (данные не показаны).

Анализ плазменных уровней SAA и маркеров метаболического статуса

ELISA, специфичный для SAA человека, использовали для анализа концентраций hSAA в плазме трансгенных животных hSAA. Мы обнаружили, что белок hSAA присутствовал в плазме от животных NC (n = 7) и HF (n = 10), получавших hSAA, тогда как hSAA не обнаруживался в плазме от животных дикого типа (n = 8).Кроме того, значительно повышенные уровни hSAA были обнаружены в плазме от животных, получавших HF, по сравнению с животными, получавшими hSAA NC (p = 0,0001, фигура 3A). Концентрации мышиного SAA в плазме измеряли с помощью ELISA, который не показал перекрестной реактивности по отношению к белку hSAA (данные не показаны). Концентрация mSAA в трех образцах плазмы (от одной hSAA и двух мышей дикого типа) от животных, получавших HF, была выше предела обнаружения анализа. Эти образцы не были включены в анализ mSAA. Уровни mSAA в плазме были повышены при HF по сравнению с животными, получавшими NC (p <0.0001; Рисунок 3B). Мы не обнаружили разницы в уровнях mSAA в плазме между hSAA и мышами дикого типа (рис. 3B). Общее количество холестерина и триглицеридов в плазме также измеряли в отдельных образцах плазмы, но уровни не изменились между hSAA и животными дикого типа в обеих группах, получавших NC (холестерин: 3,0 ± 0,2 и 3,0 ± 0,4 ммоль / л; триглицериды: 0,7 ± 0,08). и 0,7 ± 0,09 ммоль / л для мышей дикого типа и мышей hSAA, соответственно) и группы, получавшей HF (холестерин: 5,5 ± 0,9 и 5,3 ± 1,0 ммоль / л; триглицериды: 0.52 ± 0,13 и 0,55 ± 0,09 ммоль / л у мышей дикого типа и мышей hSAA соответственно). Уровень глюкозы и инсулина в крови измерялся после 4-часового голодания у животных, получавших 16-недельную диету с HF, но уровни глюкозы и инсулина не различались между животными дикого типа и hSAA (глюкоза: 12,9 ± 2,3 и 12,3 ± 2,4 ммоль / л; инсулин: 2,7 ± 1,0 и 2,0 ± 0,8 нг / мл у мышей дикого типа и мышей hSAA соответственно).

Рисунок 3. Анализ уровней SAA в плазме.

( A ) Уровни hSAA в плазме в NC (n = 7) по сравнению с самцами животных, получавших HF (n = 10).( B ) Уровни mSAA в плазме у животных NC (дикого типа (Wt) и hSAA; n = 7 и n = 6 соответственно) и животных, получавших HF (Wt и hSAA; n = 8 и n = 9, соответственно). ( C ) Уровни hSAA в плазме относительно телесного жира количественно определяют с использованием анализа DEXA у трансгенных животных-самцов. ( D ) Уровни mSAA в плазме относительно телесного жира количественно определены с использованием анализа DEXA у трансгенных животных-самцов дикого типа (n = 15) и hSAA (n = 15). ***, p <0,001. Значения даны как среднее ± стандартная ошибка среднего.

https: // doi.org / 10.1371 / journal.pone.0019609.g003

Уровни SAA в плазме в зависимости от состава тела и маркеры метаболического статуса

У людей уровни SAA в плазме коррелируют с количеством жира в организме [10]. Поэтому мы хотели проверить, связано ли количество жировой ткани с уровнями hSAA в плазме у животных с hSAA. На фигуре 3C показано, что уровни hSAA в плазме у животных hSAA, получавших рацион NC и HF, коррелируют с общим количеством телесного жира, измеренным с помощью анализа DEXA (r = 0,88, p = 4 * 10 ^-6 ).Когда результаты анализировали отдельно для животных, получавших рационы NC и HF, корреляция оставалась значимой (r = 0,65, p = 0,043) у животных, которым вводили только диету HF. Уровни mSAA в плазме коррелировали с массой тела (r = 0,79 p = 1,8 * 10 ^-7 ) и общим количеством жира в организме (r = 0,71 p = 1,0 * 10 ^-5 ; Рисунок 3D).

Также были проанализированы взаимосвязи между hSAA в плазме и общим количеством холестерина, общим количеством триглицеридов, массой тела и экспрессией hSAA в жировой ткани.Уровни hSAA в плазме коррелировали с массой тела и уровнями общего холестерина в плазме при совместном анализе животных, получавших NC и HF (таблица 2). Однако обе корреляции были потеряны при анализе животных, получавших HF и NC отдельно (таблица 2). Ни экспрессия гена hSAA в eWAT, ни в rWAT не коррелировала с уровнями hSAA в плазме (таблица 2). Экспрессию гена hSAA в BAT анализировали только у животных, получавших NC, и коррелировали с уровнями hSAA в плазме (таблица 2).

Профили липопротеинов и распределение hSAA в плазме трансгенных мышей

Чтобы исследовать, может ли hSAA, полученный из жировой ткани, изменять состав липопротеинов, объединенные образцы плазмы (n = 7–10) подвергали гель-фильтрации с FPLC.В ответ на 18-недельную диету с HF содержание холестерина липопротеинов во фракциях FPLC увеличивалось аналогичным образом как у животных дикого типа, так и у животных hSAA по сравнению с животными, получавшими NC (фиг. 4A). Распределение триглицеридов среди липопротеинов не изменилось (данные не показаны) между животными дикого типа и hSAA, получавшими NC или HF диету, соответственно. Концентрация hSAA, проанализированная с помощью ELISA в объединенных соседних FPLC-фракциях, достигла пика во фракциях, содержащих HDL (фиг. 4B), а в других фракциях hSAA не было обнаружено.Это также подтверждается наличием hSAA во фракциях HDL, выделенных ультрацентрифугированием шести индивидуальных образцов от животных, получавших hSAA NC (данные не показаны). Кроме того, уровни hSAA в HDL-содержащих фракциях FPLC от животных, зараженных HF, были увеличены по сравнению с такими же фракциями от животных, получавших NC-диету (фиг. 4B).

Рисунок 4. Распределение холестерина и hSAA в липопротеинах.

Объединенные образцы плазмы от трансгенных (hSAA) и дикого типа (Wt) самцов животных, получавших либо NC, либо HF рацион (n = 7–10 на группу), подвергали FPLC, как подробно описано в разделе «Методы».( A ) Уровни холестерина во фракциях FPLC плазмы от животных Wt и hSAA. ( B ) Уровни hSAA во фракциях FPLC плазмы от животных hSAA.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0019609.g004

Обсуждение

Здесь мы сообщаем о создании и первоначальной характеристике модели мышей с трансгенной экспрессией SAA острой фазы человека в адипоцитах под контролем энхансера / промотора aP2. У трансгенных животных hSAA белок hSAA присутствовал в плазме, демонстрируя, что SAA, полученная из жировой ткани, высвобождается в кровоток в этой модели.Кроме того, уровни hSAA в плазме у трансгенных мышей были аналогичны уровням, наблюдаемым у людей, и уровни были связаны с количеством общей жировой ткани, напоминая связь между телесным жиром и уровнями SAA в сыворотке крови у людей. Мы не обнаружили признаков повышенной экспрессии генов SAA мыши у трансгенных мышей hSAA. Напротив, мыши hSAA, получавшие HF-диету, демонстрировали пониженную экспрессию мышиного гена Saa3 в жировой ткани. Более того, уровни mSAA в плазме были сходными у мышей hSAA и дикого типа, и уровни сильно коррелировали с содержанием жира в организме, как в случае человека [10].Анализы с использованием как FPLC, так и ультрацентрифугирования показали, что концентрация hSAA достигает пика во фракциях плазмы, содержащих HDL. Следовательно, эта модель на мышах отражает фенотип SAA, наблюдаемый при ожирении человека, и, следовательно, обеспечивает подходящую модель для определения прямого воздействия SAA, полученного из жировой ткани, на сердечно-сосудистую систему.

Трансгенные мыши hSAA не проявляли видимого фенотипа. Хотя мыши hSAA имели немного меньшую массу тела по сравнению с мышами дикого типа в возрасте 11 недель, рост в течение 18 последующих недель на диете NC или HF не отличался между трансгенными животными и животными дикого типа.Следовательно, мы не можем исключить, что первоначально наблюдаемая разница в весе между мышами дикого типа и мышами hSAA была ложной находкой. У мышей hSAA, которым вводили HF-диету, уменьшился размер селезенки, что может указывать на влияние на иммунную систему. Общая масса жира тела была сходной у мышей hSAA и мышей дикого типа, но масса эпидидимальных депо была уменьшена после диеты HF у животных дикого типа по сравнению с мышами, получавшими NC, и по сравнению с трансгенными мышами hSAA. Это снижение привело к значительному различию между мышами дикого типа и трансгенными мышами.Однако, если эти данные связаны со сверхэкспрессией hSAA, требуется дальнейший анализ.

Промотор / энхансер aP2 ранее использовался в нескольких проектах для индукции специфической сверхэкспрессии адипоцитов [30]. В нашем исследовании ПЦР-анализ экспрессии гена hSAA в различных тканях в реальном времени подтвердил, что hSAA преимущественно экспрессируется в жировой ткани (рис. 2A). В анализируемой панели тканей были обнаружены только очень низкие уровни экспрессии hSAA в мышцах и сердце. Экспрессия гена hSAA в трех депо жировой ткани выявила разные уровни экспрессии: BAT> rWAT> eWAT.Об этом паттерне экспрессии ранее сообщалось у трансгенных мышей, у которых использовался промотор / энхансер aP2 [33], [34]. Можно предположить, что из-за небольшого размера BAT по сравнению с депо WAT возможно, что большая часть hSAA продуцируется в WAT у трансгенных мышей hSAA. Однако это еще предстоит показать.

Предыдущие исследования показали, что уровни SAA в сыворотке повышены у людей с ожирением и снижаются в ответ на потерю веса [2], [10], [35]. Кроме того, мы показали, что уровни SAA в сыворотке коррелируют с количеством жировой ткани [10].На мышах недавно было показано, что SAA3, изоформа SAA, экспрессируемая в жировой ткани, не попадает в кровоток [25] и что это может быть связано с взаимодействием гиалурона SAA3 в жировой ткани [36]. У людей с ожирением как повышенная экспрессия SAA в жировой ткани, так и увеличение массы жировой ткани способствуют повышению уровней SAA в сыворотке [2], [10]. В настоящем исследовании мы создали модель, в которой hSAA, полученный из жировой ткани, действительно попадает в кровоток. Уровни hSAA в плазме у мышей, получавших HF, были увеличены по сравнению с уровнями у более худых мышей, получавших hSAA NC, но уровни экспрессии hSAA в жировой ткани не изменились, что позволяет предположить, что высокие уровни hSAA в плазме обусловлены увеличением массы жировой ткани.Это также подтверждается высокой корреляцией между уровнями hSAA в плазме и количеством жира в организме. В соответствии с предыдущими исследованиями при длительном кормлении HF [37], [38], [39] мы обнаружили снижение активности гена aP2 / Fabp4 в жировой ткани придатка яичка у мышей, получавших HF. Сниженная индукция промотора aP2 может объяснить, почему уровень экспрессии hSAA не был повышен у животных с HF.

Важно отметить, что в установленной модели уровни hSAA в плазме у трансгенных мышей, получавших HF и NC, находились в тех же диапазонах, что и у тучных и худых людей [2], [10], что подтверждает идею о том, что эта модель подходит для исследований, направленных на выяснение эффектов SAA, полученных из жировой ткани.Более того, эту модель можно использовать для выяснения механизмов высвобождения SAA из адипоцитов и макрофагов, где активен промотор / энхансер aP2 [40].

SAA может влиять на развитие сердечно-сосудистых заболеваний через множество различных механизмов. Например, SAA участвует в транспорте холестерина, включая отток холестерина (обзор в [17]), и недавнее сообщение продемонстрировало, что SAA снижает обратный транспорт холестерина in vivo [41]. В кровотоке SAA преимущественно связаны с HDL [42], а SAA-HDL проявляет потенциально пониженные антиоксидантные свойства [43], а также SAA-опосредованную задержку липопротеинов [22].В настоящем исследовании анализы плазмы у трансгенных мышей показали, что hSAA был связан с HDL, что указывает на то, что hSAA, полученный из жировой ткани, имеет те же свойства, что и циркулирующий SAA у человека. Кроме того, присутствие hSAA в плазме не влияло на размер липопротеинов или содержание холестерина. Это согласуется с неизмененными профилями липопротеинов у мышей с кратковременной аденовирусной сверхэкспрессией hSAA [23], [27], а также с недавним сообщением об неизмененных уровнях холестерина ЛПВП в модели мышей с двойным нокаутом SAA1 и SAA2 [44].Wilson et al. продемонстрировал, что SAA способствует синтезу протеогликанов сосудов in vitro и, что наиболее важно, кратковременного индуцированного аденовирусом продукции hSAA было достаточно для получения проатерогенного синтеза протеогликанов in vivo [23]. Однако атеросклероз, вызванный hSAA, не был продемонстрирован [23], возможно, из-за быстрого снижения индуцированных аденовирусами уровней hSAA в плазме. В отличие от предыдущих исследований краткосрочных эффектов индуцированного аденовирусами hSAA, продуцируемого печенью, наша модель позволяет изучать долгосрочные эффекты hSAA.

Повышенная концентрация CRP в крови является общепризнанным фактором риска сердечно-сосудистых заболеваний в будущем, хотя некоторые исследования спорят против причинной роли CRP [45], [46]. Уровни SAA в сыворотке коррелируют с уровнями CRP, а также с сердечно-сосудистыми факторами риска [6], а уровни SAA имеют прогностическое значение, в некоторых случаях работая как лучший предиктор клинического исхода, чем CRP [4], [5]. У мышей уровни CRP не реагируют на воспалительные стимулы, что делает модели мышей подходящими для изучения сердечно-сосудистых эффектов SAA без вмешательства эффектов CRP.Более того, SAA, но не CRP, напрямую способствует синтезу протеогликанов в сосудах проатерогенным образом [23]. Сообщалось, что у человека уровни SAA в сыворотке связаны с толщиной интима-медиа (ТИМ) как при хронических заболеваниях, так и у молодых здоровых бессимптомных субъектов [47], [48]. Более того, SAA локализуется вместе с апоВ в атеросклеротических поражениях у мышей апоЕ — / -, получавших HF [49]. У гиперлипидемических мышей SAA была локализована совместно с апоА-I [21], [22], апоВ [22], а уровни SAA в плазме коррелировали с площадью атеросклеротического поражения [21].Эти данные, вместе с тем фактом, что уровни SAA в сыворотке повышены при ожирении человека, предполагают, что SAA, полученная из жировой ткани, является важным звеном между ожирением и развитием сердечно-сосудистых заболеваний.

В заключение, мы создали модель трансгенных мышей со специфической для жировой ткани экспрессией hSAA под контролем промотора / энхансера aP2. Повышенные уровни hSAA из жировой ткани в плазме у мышей hSAA, получавших HF, коррелировали с количеством жировой ткани, а в плазме концентрация hSAA достигла пика во фракциях, содержащих HDL.Таким образом, установленная модель аналогична ситуации, обнаруженной при ожирении у человека, и предоставит новый инструмент для изучения прямых метаболических и сосудистых эффектов hSAA, полученного из жировой ткани.

Благодарности

Мы благодарим Мари Ардинг, Камиллу Глад, Сюзанну Херинг, Вильборг Палсдоттир, Кристину Сколен, Магдалену Таубе и Центр трансгенов Norsk за техническую помощь.

Вклад авторов

Задумал и спроектировал эксперименты: KS MO BO LMSC.Проведены эксперименты: МО СА МС КС БО ПАС ЖБ LMSC. Проанализированы данные: MO SA KS PAS JB. Предоставленные реагенты / материалы / инструменты анализа: KS JB LMSC. Написал статью: МО КС ПАС ЛМСК.

Ссылки

1. 1. Calle EE, Thun MJ, Petrelli JM, Rodriguez C, Heath CW (1999) Индекс массы тела и смертность в предполагаемой когорте взрослых в США. N Eng J Med 341: 1097–1105.
2. 2. Ян Р.З., Ли М.Дж., Ху Х., Поллин Т.И., Райан А.С. и др. (2006) Сывороточный амилоид A острой фазы: воспалительный адипокин и потенциальная связь между ожирением и его метаболическими осложнениями.PLoS Med 3: e287.
3. 3. Юдкин JS, Stehouwer CD, Emeis JJ, Coppack SW (1999) C-реактивный белок у здоровых субъектов: ассоциации с ожирением, инсулинорезистентностью и эндотелиальной дисфункцией: потенциальная роль цитокинов, происходящих из жировой ткани? Артериосклер тромб Vasc Biol 19: 972–978.
4. 4. Косуге М., Эбина Т., Исикава Т., Хиби К., Цукахара К. и др. (2007) Сывороточный амилоид А является лучшим предиктором клинических исходов, чем С-реактивный белок, при острых коронарных синдромах без подъема сегмента ST.Circ J 71: 186–190.
5. 5. Джонсон Б.Д., Кип К.Е., Марроквин О.К., Ридкер П.М., Келси С.Ф. и др. (2004) Сывороточный амилоид А как предиктор ишемической болезни сердца и сердечно-сосудистых исходов у женщин: оценка женского синдрома ишемии, спонсируемая Национальным институтом сердца, легких и крови (WISE). Тираж 109: 726–732.
6. 6. Jylhävä J, Haarala A, Eklund C, Pertovaara M, Kahonen M, et al. (2009) Сывороточный амилоид А независимо связан с факторами метаболического риска, но не с ранним атеросклерозом: исследование сердечно-сосудистого риска у молодых финнов.J Intern Med 266: 286–295.
7. 7. Sjöholm K, Lundgren M, Olsson M, Eriksson JW (2009) Ассоциация уровней амилоида A в сыворотке с размером адипоцитов и уровнями адипокинов в сыворотке: различия между мужчинами и женщинами. Цитокин 48: 260–266.
8. 8. Ridker PM, Hennekens CH, Buring JE, Rifai N (2000) C-реактивный белок и другие маркеры воспаления в прогнозировании сердечно-сосудистых заболеваний у женщин. N Engl J Med 342: 836–843.
9. 9. Urieli-Shoval S, Cohen P, Eisenberg S, Matzner Y (1998) Широко распространенная экспрессия сывороточного амилоида A в гистологически нормальных тканях человека.Преимущественная локализация в эпителии. J. Histochem Cytochem 46: 1377–1384.
10. 10. Sjöholm K, Palming J, Olofsson LE, Gummesson A, Svensson PA, et al. (2005) Поиск на микроматрицах генов, преимущественно экспрессируемых в адипоцитах сальника человека: жировая ткань как основное место продукции сывороточного амилоида A. J. Clin Endocrinol Metab 90: 2233–2239.
11. 11. Пуату С., Вигери Н., Канселло Р., Де Маттеис Р., Синти С. и др. (2005) Сывороточный амилоид А: производство белых адипоцитов человека и регулирование ожирением и питанием.Диабетология 48: 519–528.
12. 12. Jernås M, Palming J, Sjöholm K, Jennische E, Svensson PA, et al. (2006) Разделение адипоцитов человека по размеру: гипертрофические жировые клетки демонстрируют отчетливую экспрессию генов. FASEB J 20: 1540–1542.
13. 13. Salans LB, Knittle JL, Hirsch J (1968) Роль размера жировых клеток и чувствительности к инсулину жировой ткани в непереносимости углеводов при ожирении человека. Дж. Клин Инвест 47: 153–165.
14. 14. Ван YC, Kuo WH, Chen CY, Lin HY, Wu HT и др.(2009) Докозагексаеновая кислота регулирует сывороточный белок амилоида А, способствуя липолизу за счет подавления перилипина. J Nutr Biochem.
15. 15. Су С.Б., Гун В., Гао Дж.Л., Шен В., Мерфи П.М. и др. (1999) Семи трансмембранный рецептор, связанный с G-белком, FPRL1, опосредует хемотаксическую активность сывороточного амилоида А в отношении фагоцитарных клеток человека. J Exp Med 189: 395–402.
16. 16. Hatanaka E, Monteagudo PT, Marrocos MS, Campa A (2007) Взаимодействие между сывороточным амилоидом A и лейкоцитами — возможная роль в прогрессировании сосудистых осложнений при диабете.Immunol Lett 108: 160–166.
17. 17. van der Westhuyzen DR, de Beer FC, Webb NR (2007) Транспорт холестерина ЛПВП во время воспаления. Curr Opin Lipidol 18: 147–151.
18. 18. Пуату С., Диву А., Фати А., Торджман Дж., Хугол Д. и др. (2009) Роль сывороточного амилоида а в перекрестном взаимодействии адипоцитов и макрофагов и оттоке адипоцитов холестерина. J Clin Endocrinol Metab 94: 1810–1817.
19. 19. Coetzee GA, Strachan AF, van der Westhuyzen DR, Hoppe HC, Jeenah MS, et al.(1986) Сывороточный амилоид А-содержащий липопротеин высокой плотности человека 3. Плотность, размер и состав аполипопротеинов. J Biol Chem 261: 9644–9651.
20. 20. Ancsin JB, Kisilevsky R (1999) Сайт связывания гепарина / гепарансульфата на апо-сывороточном амилоиде A. Значение для терапевтического вмешательства при амилоидозе. J Biol Chem 274: 7172–7181.
21. 21. Льюис К.Е., Кирк Е.А., Макдональд Т.О., Ван С., Уайт Т.Н. и др. (2004) Повышение уровня амилоида а в сыворотке крови, вызванное пищевым холестерином, связано с усилением атеросклероза у мышей.Тираж 110: 540–545.
22. 22. O’Brien KD, McDonald TO, Kunjathoor V, Eng K, Knopp EA, et al. (2005) Удержание амилоида А и липопротеинов в сыворотке на мышиных моделях атеросклероза. Артериосклер Thromb Vasc Biol 25: 785–790.
23. 23. Уилсон П.Г., Томпсон Дж.С., Уэбб Н.Р., де Бир ФК, Кинг В.Л. и др. (2008) Сывороточный амилоид А, но не С-реактивный белок, стимулирует синтез протеогликанов в сосудах проатерогенным образом. Am J Pathol 173: 1902–1910.
24. 24.Scheja L, Heese B, Zitzer H, Michael MD, Siesky AM и др. (2008) Сывороточный амилоид А острой фазы как маркер инсулинорезистентности у мышей. Exp Diabetes Res 2008: 230837.
25. 25. Чиба Т., Хан С.Й., Вайсар Т., Шимокадо К., Карги А. и др. (2009) Сывороточный амилоид A3 не влияет на уровни циркулирующих SAA. J. Lipid Res. 50: 1353–1362.
26. 26. Улар С.М., Уайтхед А.С. (1999) Сывороточный амилоид А, главный реагент острой фазы позвоночных. Eur J Biochem 265: 501–523.
27. 27. Hosoai H, Webb NR, Glick JM, Tietge UJ, Purdom MS и др. (1999) Экспрессия сывороточного белка амилоида А в отсутствие ответа острой фазы не снижает уровни холестерина ЛПВП или апоА-I у трансгенных мышей человека. J. Lipid Res. 40: 648–653.
28. 28. Kindy MS, de Beer MC, Yu J, de Beer FC (2000) Экспрессия мышиного острофазового (SAA1.1) и конститутивного (SAA4) изотипов амилоида A сыворотки: влияние на профили липопротеинов. Артериосклер Thromb Vasc Biol 20: 1543–1550.
29. 29. Кабана В.Г., Фенг Н., Рирдон К.А., Люкенс Дж., Уэбб Н.Р. и др. (2004) Влияние апоА-I и апоЕ на образование сывороточных амилоид А-содержащих липопротеинов in vivo и in vitro. J. Lipid Res. 45: 317–325.
30. 30. Росс С.Р., Грейвс Р.А., Гринштейн А., Платт К.А., Шю Х.Л. и др. (1990) Жиро-специфический энхансер является основной детерминантой экспрессии гена адипоцита P2 in vivo. Proc Natl Acad Sci U S A 87: 9590–9594.
31. 31. Перселл-Хьюн Д.А., Фарез Р.В. мл., Джонсон Д.Ф., Флинн Л.М., Пьеротти В. и др.(1995) У трансгенных мышей, экспрессирующих высокие уровни аполипопротеина B человека, развиваются тяжелые атеросклеротические поражения в ответ на диету с высоким содержанием жиров. Дж. Клин Инвест 95: 2246–2257.
32. 32. Стольман М., Давидссон П., Канмерт И., Розенгрен Б., Борен Дж. И др. (2008) Протеомика и липиды липопротеинов, выделенных при низких концентрациях солей в D2O / сахарозе или в KBr. J. Lipid Res. 49: 481–490.
33. 33. Камей Н., Тобе К., Сузуки Р., Осуги М., Ватанабе Т. и др. (2006) Сверхэкспрессия моноцитарного хемоаттрактантного протеина-1 в жировой ткани вызывает рекрутирование макрофагов и инсулинорезистентность.J Biol Chem 281: 26602–26614.
34. 34. Лонго К.А., Райт В.С., Канг С., Герин И., Чан Ш. и др. (2004) Wnt10b подавляет развитие белой и коричневой жировой ткани. J Biol Chem 279: 35503–35509.
35. 35. Пуату С., Кусье С., Руо С., Купай М., Канселло Р. и др. (2006) Сывороточный амилоид А: маркер слабого воспаления, вызванного ожирением, но не метаболического статуса. Ожирение (Серебряная весна) 14: 309–318.
36. 36. Хан CY, Субраманиан С., Чан С.К., Омер М., Чиба Т. и др.(2007) Сывороточный амилоид A3 и гиалуронан, полученные из адипоцитов, играют роль в привлечении и адгезии моноцитов. Диабет 56: 2260–2273.
37. 37. Надлер С.Т., Стоер Дж. П., Шулер К.Л., Танимото Г., Янделл Б.С. и др. (2000) Экспрессия адипогенных генов снижается при ожирении и сахарном диабете. Proc Natl Acad Sci U S A 97: 11371–11376.
38. 38. Soukas A, Cohen P, Socci ND, Friedman JM (2000) Лептин-специфические паттерны экспрессии генов в белой жировой ткани.Genes Dev 14: 963–980.
39. 39. Kim SJ, Jung JY, Kim HW, Park T (2008) Эффекты экстракта Juniperus chinensis против ожирения связаны с повышенной экспрессией AMP-активированной протеинкиназы и фосфорилированием во висцеральной жировой ткани крыс. Биол Фарм Булл 31: 1415–1421.
40. 40. Маковски Л., Борд Дж. Б., Маеда К., Бабаев В. Р., Уйсал К. Т. и др. (2001) Отсутствие макрофагального белка, связывающего жирные кислоты aP2, защищает мышей с дефицитом аполипопротеина E от атеросклероза.Nat Med 7: 699–705.
41. 41. Аннема В., Нийстад Н., Толле М., де Бур Дж. Ф., Буйс Р. В. и др. (2010) Миелопероксидаза и сывороточный амилоид А вносят вклад в нарушение обратного транспорта холестерина in vivo во время острой фазы ответа, но не секреторная фосфолипаза А2 группы IIA. J Lipid Res.
42. 42. Benditt EP, Eriksen N (1977) Амилоидный белок SAA связан с липопротеином высокой плотности из сыворотки крови человека. Proc Natl Acad Sci U S A 74: 4025–4028.
43. 43.Кабана В.Г., Рирдон С.А., Фенг Н., Нит С., Люкенс Дж. И др. (2003) Параоксоназа сыворотки: влияние аполипопротеинового состава ЛПВП и острофазовый ответ. J. Lipid Res. 44: 780–792.
44. 44. de Beer MC, Webb NR, Wroblewski JM, Noffsinger VP, Rateri DL, et al. (2010) Влияние сывороточного амилоида А на состав и уровни липопротеинов высокой плотности. J Lipid Res.
45. 45. Теннент Г.А., Хатчинсон В.Л., Кахан М.К., Хиршфилд Г.М., Галлимор Дж. Р. и др.(2008) Трансгенный человеческий CRP не является проатерогенным, проатеротромботическим или провоспалительным у мышей ароЕ — / -. Атеросклероз 196: 248–255.
46. 46. Эллиотт П., Чемберс Дж. К., Чжан В., Кларк Р., Хоупвелл Дж. К. и др. (2009) Генетические локусы, связанные с уровнями С-реактивного белка и риском ишемической болезни сердца. ИАМА 302: 37–48.
47. 47. Buyukhatipoglu H, Tiryaki O, Tahta K, Usalan C (2007) Воспаление как фактор риска интима-медиального утолщения сонной артерии, показатель субклинического атеросклероза у гемодиализных пациентов: роль хламидиоза и цитомегаловирусной инфекции.Нефрология (Карлтон) 12: 25–32.
48. 48. Uurtuya S, Kotani K, Koibuchi H, Taniguchi N, Yamada T (2009) Сывороточный белок амилоида A и толщина интимы-медиа сонной артерии у здоровых молодых людей. J Atheroscler Thromb 16: 299–300.
49. 49. King VL, Hatch NW, Chan HW, de Beer MC, de Beer FC и др. (2010) Мышиная модель ожирения с ускоренным атеросклерозом. Ожирение (Серебряная весна) 18: 35–41.

Рекомбинантный белок HSAA (Rhodococcus sp.) (OPCA205241) — Spezies und Preis auf Anfrage

Артикул: ASB-OPCA205241

Produktübersicht

Артикул:	Рекомбинантный белок HSAA (Rhodococcus sp.) (OPCA205241) — Spezies und Preis auf Anfrage
Артикул:	ASB-OPCA205241
Hersteller Номер объявления:	OPCA205241
Альтернативный номер:	ASB-OPCA205241-50UG, ASB-OPCA205241-200UG, ASB-OPCA205241-500UG
Херстеллер:	Aviva
Wirt:	Э.coli, дрожжевые клетки, клетки насекомых или млекопитающих могут быть выбраны выше для определения цены.
Категория:	Белок / пептид
Заявка:	ELISA, WB
Spezies Reaktivität:	Rhodococcus sp.

Produkteigenschaften

UniProt:	Q0S811
Рейнхейт:	Более 85% по данным SDS-PAGE.
Lagerung:	от 2 ° C до 8 ° C, -20 ° C или -80 ° C

Связанные с пищевым белком или свободные аминокислоты по-разному влияют на морфологию кишечника, экспрессию генов переносчиков аминокислот и сывороточные аминокислоты свиней, подвергшихся тепловому стрессу., Журнал зоотехники

Свиньи, подвергшиеся тепловому стрессу (HS), повышают температуру тела, что может повредить эпителий кишечника и повлиять на всасывание и доступность аминокислот (AA). Переваривание белков и обмен веществ еще больше повышают температуру тела. Был проведен эксперимент с шестью парами свиней (исходной массой тела 47,3 ± 1,3 кг), подвергнутых воздействию естественного HS, чтобы оценить влияние замены пищевых белков, связанных с белками, на свободные AA на морфологию и экспрессию генов эпителия кишечника и концентрацию в сыворотке крови (SC ) бесплатного AA.Лечение было следующим: диета с высоким содержанием белка, 21,9% сырого протеина (CP) (HShp) и диета с низким содержанием белка, 13,5% CP, дополненная кристаллическими Lys, Thr, Met, Trp, His, Ile, Leu, Phe и Val (HSaa). Диета HShp соответствовала или превосходила все требования AA. Диета HSaa была разработана на основе идеального белка. В течение 21 дня исследования свиней кормили одинаковым количеством в 07:00 и 19:00. Образцы крови собирали в 17:00 (2,0 часа до ужина), 20:30 и 21:30 (1,5 и 2,5 часа после ужина).В конце все свиньи были умерщвлены для сбора слизистой оболочки кишечника и 5-сантиметрового среза каждого сегмента тонкой кишки от каждой свиньи. Были проанализированы показатели ворсинок, экспрессия переносчиков АК (y + L и B0) в слизистой оболочке и СК АК. Температура окружающей среды ежедневно колебалась от 24,5 до 42,6 ° C. Диета не повлияла на прибавку в весе и G.F. Высота ворсинок, как правило, была больше (P ≤ 0,10), а отношение высоты ворсинок к глубине крипты было выше в двенадцатиперстной кишке и тощей кишке свиней, получавших корм HSaa (P

中文 翻译 ：

---

日粮 结合 蛋白质 或 游离 氨基酸 会 不同 程度 影响 热 应激 猪 的 肠道 形态 ， 氨基酸 蛋白 的 基因 表达 和 血清 氨基酸。

暴露 于 热 应激 （HS） 的 猪 会 升高 体温 ， 这 可能 会 肠道 并 （AA） 的 吸收 和 利用率。 的 消化 和 代谢 会 进一步 升高 体温。 对 六 对 猪 （体重 为 47.3 ± 1.3 体） 天然 HS 进行 了 一项 ， 以 评估 用 AA 替代 蛋白 的 AA 形态 ， 基因 表达 浓度 （SC） 的） 的 免费 AA。 治疗 方法： 高蛋白 ， 21,9 的 粗 蛋白 （CP） 饮食 （HShp） 和 低 蛋白 ， 13,5 的 CP 饮食 ， 并 补充 体 Lys ， Thr ， Met ， Trp ， His ， Ile ， Leu ， Phe 和 Val （HSaa） HShp 饮食 达到 或 超过 AA 要求 。HSaa 饮食 是 根据 理想 蛋白质 配制 的。 在 为期 21 天 的 研究 中 ， 分别 在 0700 和 1900 小时 给 猪 的 在 1700 » ） ， 2030 小时 和 2130 小时 （晚餐 后 1.5 和 2.5 小时） 采集 血液 样本。 最后 ， 所有 猪 的 ， 从 的 小肠 的 每个 5cm。 了 绒毛 测量中 AA 转运 蛋白 （y + L 和 B0） 的 表达 以及 AA 的 SC。 环境 温度 每天 在 24,5 42,6 ° C,。 体重增加 和 GF 不受 饮食 HSaa 日粮 的猪 的 十二指肠 和 空肠 绒毛 高度 倾向于 更大 （P≤0.10） ， 绒毛 高度 ： 隐窝 深度 （（P <0.05）。 空肠 转运 蛋白 y + L 的 基因 表达 趋于 降低 （P < 0。10） HSaa 猪 回肠 中 的 转运 蛋白 B0 较低 （P <0.05） HShp 猪 的 Arg ， His ， Ile ， Leu ， Thr ， Trp 和 Val 的 餐前 （1700 小时） SC 较高 （P <0,05） ， Phe 倾向于 较高 （P <0,10）。 在 2030 小时 （餐后 1.5 小时） HSaa 猪 的 血清 Lys ， Met 和 Thr 升高 （P <0,05）。 在 2130 小时 （2,5 小时） ， Arg ， His ， Ile ， Phe 和 Trp 降低 （P <0,05） ； 大都会 高（P <0,05）; HSaa 的 Lys 倾向于 更高 （P <0,10）。 总之 ， 与 只 饲喂 蛋白 结合 型 的 日粮 猪 相比 ， 饲喂 蛋白 日粮 和 的 HS 猪 可 减少 肠并 改善 其 吸收 能力。

Ариламин-N-ацетилтрансферазы у микобактерий — WRAP: Портал архива исследований Уорика

Сим, Эдит, Сэнди, Джеймс, Евангелопулос, Димитриос, Фуллам, Элизабет, Бхакта, Санджиб, Вествуд, Исаак, Крылова, Анна, Лэк, Натан и Ноубл, Мартин (2008) Ариламин-N-ацетилтрансферазы в микобактериях. Текущий метаболизм лекарств, Том 9 (Номер 6). С. 510-519. DOI: 10.2174 / 138920008784892100

Результаты исследования недоступны в этом хранилище, свяжитесь с автором.

Запросить изменения для записи.

Абстрактные

Полиморфная человеческая ариламин-N-ацетилтрансфераза (NAT2) инактивирует противотуберкулезное лекарственное средство изониазид путем ацетилпереноса от ацетилСоА.Существуют активные белки NAT, кодируемые гомологичными генами микобактерий, включая M. tuberculosis, M. bovis BCG, M. smegmatis и M. marinum. Кристаллографические структуры NAT из M. smegmatis и M. marinum как нативных ферментов и связанных изониазидом имеют сходную складку с первой структурой NAT, Salmonella typhimurium NAT. В первых двух доменах есть три приблизительно равных домена и существенная каталитическая триада активного центра, состоящая из цистеина, гистидина и аспартата. Ацетильная группа от acetylCoA переносится на цистеин, а затем на акцептор ацетила e.грамм. изониазид. NAT M. marinum связывает CoA в более открытом режиме по сравнению с связыванием CoA с NAT2 человека. Структура микобактериального NAT может способствовать его роли в синтезе липидов клеточной стенки, что было выявлено с помощью исследований делеции генов. Белок NAT необходим для выживания M. bovis BCG в макрофагах, как и белки, кодируемые другими генами в том же кластере генов (hsaA-D). HsaA-D разлагает холестерин, необходимый для выживания микобактерий внутри макрофагов. Экспрессия Nat еще предстоит полностью понять, но она координируется с hsaA-D и другими генами стрессовой реакции у микобактерий.Гены амидсинтазы у стрептомицетов также являются естественными гомологами. Предполагается, что амидсинтазы будут катализировать образование внутримолекулярных амидных связей и создание циклических молекул, например гельданамицин. Отсутствие консервирования остатков расщепления, связывающих СоА, M. marinum NAT предполагает, что механизм реакции амидсинтазы не включает растворимый промежуточный продукт СоА во время образования амида и замыкания кольца.

Тип товара:	Журнальная статья
Подразделения:	Факультет естественных наук> Науки о жизни (2010-)
Название журнала или публикации:	Текущий метаболизм лекарства
Издатель:	Bentham Science Publishers Ltd.
ISSN:	1389-2002
Официальная дата:	2008
Даты:
Объем:	Том 9
Номер:	Номер 6
Диапазон страниц:	с. 510-519
DOI:	10.2174/138920008784892100
Статус:	Рецензия:
Статус публикации:	Опубликовано
Права доступа к Опубликованной версии:	Ограниченный доступ или доступ по подписке

Запросить изменения или добавить в запись полнотекстовые файлы

Действия сотрудников репозитория (требуется вход в систему)

Просмотреть товар

Ариламин-N-ацетилтрансферазы в микобактериях | Bentham Science

Название: Ариламин-N-ацетилтрансферазы в микобактериях

ОБЪЕМ: 9 ВЫПУСК: 6

Автор (ы): Эдит Сим, Джеймс Сэнди, Димитриос Эвангелопулос, Элизабет Фуллам, Санджиб Бхакта, Исаак Вествуд, Анна Крылова, Натан Лак и Мартин Нобл

Место работы: Отделение фармакологии Оксфордского университета, Мэнсфилд-роуд, Оксфорд OX1 3QT, Великобритания.

Ключевые слова: Изониазид, туберкулез, M. smegmatis, M. marinum, ариламин

Реферат: Полиморфная человеческая ариламин-N-ацетилтрансфераза (NAT2) инактивирует противотуберкулезный препарат изониазид путем ацетилпереноса от ацетилСоА. Существуют активные белки NAT, кодируемые гомологичными генами микобактерий, включая M. tuberculosis, M. bovis BCG, M. smegmatis и M. marinum. Кристаллографические структуры НАТ M.smegmatis и M. marinum, как нативные ферменты и связанные с изониазидом, имеют сходную складку с первой структурой NAT, Salmonella typhimurium NAT. В первых двух доменах есть три приблизительно равных домена и существенная каталитическая триада активного центра, состоящая из цистеина, гистидина и аспартата. Ацетильная группа от acetylCoA переносится на цистеин, а затем на акцептор ацетила, например изониазид. NAT M. marinum связывает CoA в более открытом режиме по сравнению с связыванием CoA с NAT2 человека. Структура микобактериального NAT может способствовать его роли в синтезе липидов клеточной стенки, что было выявлено с помощью исследований делеции генов.