Бца состав аминокислот: Аминокислота BCAA: польза, состав и применение

Польза аминокислот с разветвленной цепью (BCAA) для спортсменов — Блог

Автор: Кэти Киссейн, магистр, зарегистрированный диетолог, сертифицированный специалист по спортивной диетологии

Три аминокислоты с разветвленной цепью (ВСАА) — это валин, лейцин и изолейцин. Они входят в состав 20 аминокислот, необходимых организму для выработки белков и незаменимых аминокислот. Эти аминокислоты считаются разветвленными, потому что имеют «разветвленную» боковую цепь, состоящую из одного атома углерода и трех атомов водорода. Такие аминокислоты следует употреблять с пищей или добавками.  

BCAA — единственный вид аминокислот, которые попадают непосредственно в кровоток, минуя печень. Это значит, что употребление аминокислот с разветвленной цепью может напрямую влиять на их концентрацию в мышечной ткани. Аминокислоты с разветвленной цепью, рекомендуемые к употреблению до, во время или после тренировки, обладают рядом доказанных полезных свойств: снижают утомляемость, усиливают рост мышц, способствуют восстановлению и улучшают психическую концентрацию. Предлагаем вашему вниманию результаты исследования:

BCAA для роста мышц 

BCAA стимулируют метаболизм энергии во время тренировки. В частности, в ходе исследования было продемонстрировано участие лейцина в повышенном синтезе белка в мышцах. BCAA могут усиливать синтез белка за счет своего воздействия на гормон роста и обеспечения организма аминокислотами, необходимыми для синтеза белка.

Важно помнить, что для производства мышечного белка необходимы все девять незаменимых аминокислот.  Если для синтеза мышечного белка необходимы все незаменимые аминокислоты, то потребление только трех из девяти незаменимых аминокислот может быть недостаточным для стимулирования роста мышечного белка. Прием пищевых добавок с BCAA в сочетании с интактным белком, таким как  сывороточный белок в форме пищевой добавки, может способствовать повышению потенциала анаболического ответа на физические упражнения. 

ВСАА для психической концентрации

BCAA могут повышать сопротивляемость усталости и увеличенной тучной оксидации во время тренировки. Аминокислоты с разветвленной цепью могут способствовать снижению уровня лактата и улучшению оксидации мышц. Исследование, в котором участвовали футболисты, принимавшие BCAA, показало, что группа испытуемых, принимавших BCAA, имела чуть более высокую скорость реакции в сравнении с группой плацебо, что указывает на возможную пользу приема BCAA до тренировки для видов спорта, требующих быстрой реакции.  

Снижение утомляемости

В одном исследовании изучалось применение добавок с ВСАА среди участников велогонки и были получены свидетельства в пользу приема BCAA для снижения усталости. У велосипедистов, которым давали добавку с BCAA до тренировки и каждые 15 минут во время тренировки, наблюдалось небольшое снижение оценки воспринимаемой нагрузки.  

Повышенная выносливость

Одиннадцать мужчин, посещавших тренировки с отягощением, получали либо 20 граммов BCAA, либо плацебо, и группа получавших BCAA демонстрировала стабильно более высокую выносливость во время тренировки по сравнению с контрольной группой.

Улучшенное восстановление

Выводы исследователей о способности BCAA влиять на восстановление после тренировки неоднозначны. В одном исследовании наблюдалось уменьшение повреждения мышц у физически неподготовленных женщин, выполнявших семь подходов по 20 приседаний и принимавших добавки с ВСАА. Другое исследование показало значительное снижение повреждения мышц у физически подготовленных субъектов при приеме BCAA в сравнении с контрольной группой. У испытуемых, принимавших добавки с BCAA, также отмечалось уменьшение крепатуры. Другие исследования не показали сколько-нибудь значительных различий в восстановлении между принимавшими BCAA и принимавшими плацебо.

Когда и как использовать BCAA

• Аминокислоты с разветвленной цепью могут быть полезны в некоторых случаях. Если потребление белка является адекватным, то введение в рацион дополнительных BCAA может не повлиять на рост мышц. Если человек не может получать достаточное количество незаменимых аминокислот с пищей из-за диетических ограничений или стремления похудеть и сократить калории, вероятно, ему будет полезно принимать добавки с BCAA до или во время тренировки. 
• Прием BCAA до или во время тренировки может несколько улучшить скорость реакции и уменьшить усталость при длительной деятельности. 
• Аминокислоты с разветвленной цепью, наряду с углеводами, могут способствовать снижению оценки воспринимаемой нагрузки во время тренировки, но исследователям не удалось убедительно доказать, что это способствует повышению результативности. 
• Добавки с BCAA могут в некоторой степени помогать восстановлению за счет уменьшения повреждения мышц, но, вероятно, BCAA не оказывают влияния на снижение крепатуры. Защитная роль BCAA в восстановлении может быть более выраженной у физически неподготовленных людей в сравнении с физически подготовленными. 
• Многие исследования отличались по объему принимавшихся ВСАА, а также по времени приема (до или во время активности). Это может влиять на результаты. Вполне возможно, что полезность добавки зависит от дозировки и времени приема. 
• По данным исследования, добавки с BCAA лучше всего принимать до или во время тренировки. После тренировки рекомендуется принять пищу или добавку, содержащую все 9 незаменимых аминокислот. Примеры таких продуктов: мясо, рыба, йогурт, изолят сывороточного белка или чечевица с киноа. 
• Многие исследования проводились с участием ограниченного количества испытуемых. Проведение дополнительных исследований с большим количеством участников помогло бы сделать более однозначные выводы о возможных преимуществах добавок BCAA.

Источники:

1. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/15173434
2. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21297567
3. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/22050133
4. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/18704484
5. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/9124069
6. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/8876349
7. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20601741
8. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21744005
9. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/15173434
10. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/25202189
11. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/26853239
12. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/11310926
13. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28944645
14. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/24477835
15. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/22569039
16. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5568273
17. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/16365096

---

Эта статья была написана Кэти Киссан (MS, RD, CSSD), сертифицированным диетологом и специалистом по спортивной диетологии с обширным опытом в области питания, включая диеты при диабете, аллергии/непереносимости пищи и расстройства питания. Кэти получила степень бакалавра по кинезиологии в Университете Колорадо и степень магистра в области науки питания в Университете штата Колорадо. Кэти является владельцем NoCo Sports Nutrition и работает со многими спортсменами, в том числе молодежными атлетами, коллегиальными и профессиональными спортсменами. В настоящее время она включена в реестр диетологов объединенного государственного олимпийского комитета. Как спортсмен, она обладает уникальным пониманием многих проблем, с которыми сталкиваются атлеты.

Продукция, представленная в статье

Поделиться этой статьей

BCAA — аминокислоты c разветвленными цепочками

BCCA – это комплекс, в состав которого входят три незаменимые аминокислоты: изолейцин, лейцин и валин. Аминокислоты BCAA (от англ. Branched-Chain Amino Acids) отличаются от других видов аминокислот своим строением: на конце они имеют разветвленную цепочку атомов углерода.

Еще одно отличие комплекса BCCA от остальных семнадцати аминокислот заключается в том, что он является основным материалом для построения в организме новых мышц. После того, как аминокислоты BCAA попадают в организм человека, они метаболизируются в мышцах, что в свою очередь способствует повышению спортивных показателей и улучшению состояния здоровья. Кроме того, данный комплекс аминокислот составляет 35% незаменимых аминокислот в мышцах человека, участвует в процессах восстановления и анаболизма, обладает аникатаболическим свойством и к тому же абсолютно безопасен для здоровья. Необходимо отметить, что организм человека не способен самостоятельно синтезировать аминокислоты BCAA, поэтому получить их можно только с приемом пищи и специальными добавками.

Роль Аминокислот BCCA в организме человека

• Являются исходным продуктом необходимым для синтеза мышечного белка.
  
• Являются исходным продуктом для выработки энергии.
  
• Подавляют процесс разрушения мышечных клеток (катаболизм).
  
• Являются метаболическими модуляторами: стимулируют выработку и синтез мышечного протеина за счет активации mTOR (белка, регулирующего рост и деление клеток) и PI3K (одного из путей, ускоряющего рост мышц).
  
• Являются источником для выработки иных аминокислот, в особенности глютамина и аланина.
  
• Стимулируют выработку инсулина (анаболического гормона).
  
• Сжигают излишние жиры за счет повышения лептина в адипоцитах (клетках, из которых состоит жировая ткань) посредством mTOR.

Применение BCCA в питании бодибилдеров

Положительные свойства комплекса аминокислот BCCA при занятии бодибилдингом:

• Предохранение мышечной ткани от разрушения.
  
• Рост сухой мышечной массы.
  
• Повышение силовых показателей.
  
• Снижение количества жиров в организме.

Из вышеперечисленного видно, что аминокислоты BCAA выполняют целый комплекс полезных функций, поэтому их с успехом можно применять во время набора мышечной массы, похудения, при аэробных тренировках и работе на рельеф.

Метаболизм BCAA в организме

Чтобы дать более полное представление о роли аминокислот BCAA в спорте, подробно рассмотрим механизмы их усваивания, с доскональным разбором биохимических процессов, опираясь на научную литературу и исследования.

Аминокислоты BCAA как энергетический источник

За счет выполнения физических упражнений увеличивается окисление комплекса BCAA, что позволяет постоянно поддерживать в организме нормальный энергетический уровень путем превращения аминокислот в глюкозу – легкодоступный источник энергии.

Эксперименты, проводимые в исследованиях, показывают, что во время и после тренировок у атлетов значительно снижается уровень концентрации аминокислот BCAA (в особенности лейцина). Сразу после этого в организме начинается метаболический процесс, направленный на восстановление нормальной концентрации представленных выше аминокислот. Другими словами начинается разрушение мышечных белков, которые являются основным источником для пополнения аминокислотного комплекса BCAA. Дополнительный прием BCAA в виде добавок, поможет восстановить их нормальную концентрацию и подавить катаболизм.

Также, ученые уделяют особое внимание и тому, какую роль играет лейцин в организме спортсмена. Исходя из исследований, лейцин является источником основного энергетического исходного продукта организма (АТФ). Окисление лейцина в мышечных клетках дает даже больше АТФ, чем точно такое же количество глюкозы. А если учесть тот аспект, что окисление глюкозы и лейцина осуществляется по разным путям, то можно сделать следующий вывод: атлет получает сразу два мощных источника исходного продукта, иными словами восстанавливает свои силы в несколько раз быстрее.

Синтез белка мышц

Как уже было сказано, аминокислоты BCAA составляют 35% всех мышечных белков, поэтому их можно называть основным строительным материалом мышц. Белок может вырабатываться лишь при наличии свободных аминокислот, в ином случае рост мышечной массы прекращается.

Когда организм находится в полном покое, для поддержания нормального уровня аминокислот достаточно принимать протеин, который удовлетворяет метаболические нужды. Но во время и после тренировок, потребность организма в аминокислотах значительно повышается, а аминокислотная концентрация истощается, поэтому возникает срочная необходимость в больших поставках аминокислот. Принимая BCAA в виде добавок, спортсмен создает все необходимые условия для восстановления аминокислотной концентрации и строения новых мышечных волокон сразу после тренинга.

Аминокислоты BCCA как исходные компоненты глютамина

Аминокислота глютамин играет особую роль в процессе роста мышц. Глютамин, содержащийся в довольно большом количестве в мышцах и иных тканях, выполняет функцию регулирования выработки всех видов белка организма, смещает баланс азота в анаболическую сторону, увеличивает мышечные клетки и усиливает синтез гормона роста. Затраты глютамина во время тренинга можно покрывать аминокислотами BCAA, которые преобразовываются в него прямо в мышечных клетках.

Регуляция выделения инсулина, PI3K и выработка белка

Один из путей, который способствует ускорению роста мышц, а именно phosphatodyl-inositol-3-киназный путь (PI3K) ускоряет процесс поступления аминокислот в клетки и регулирует потребление глюкозы. Кроме того, за счет PI3K инсулин осуществляет стимулирование синтеза белка в организме.

Аминокислоты BCAA (в особенности лейцин) обладают способностью усиливать выделение инсулина и напрямую приводить в активное состояние путь PI3K, исходя из этого, синтез белка начинается даже при отсутствии в организме инсулина. Употребление BCAA и углеводов после тренинга приводит к увеличению концентрации инсулина, активному потреблению клетками полезных питательных веществ и к ускорению роста мышечной массы.

Активация mTOR ускоряет процесс синтезирования белка

mTOR – это белок, регулирующий выработку нового белка, а также рост и деление клеток. Представленное вещество срабатывает как энергетический датчик, приходя в активное состояние тогда, когда уровень АТФ очень высокий, и наоборот, переставая функционировать при низком уровне АТФ.

Больше всего энергии затрачивается на процесс выработки протеина, поэтому он нуждается в больших количествах исходного продукта (АТФ). Помимо этого, необходимо и большое количество строительного материала, то есть аминокислот BCAA. Из экспериментов ученых видно, что сила анаболических процессов в организме регулируется mTOR, который при нормальном уровне BCAA и исходного продукта активирует выработку белка. Ученые выявили, что главную роль в запуске mTOR играет лейцин, который входит в состав комплекса BCAA.

Воздействие аминокислот BCCA на жиры

Употребление BCAA стимулирует процесс экспрессии генов гормона лептина в жировых клетках, который протекает по mTOR пути. Лептин является сложным гормоном, регулирующим многие метаболические процессы, например, такие как, аппетит, вес тела, отложение и расход жиров.

Выделение лептина взаимосвязано с количеством жиров в организме: чем меньше процент жира в теле, тем ниже выделение лептина и наоборот. Когда вы проходите курс по сжиганию жиров и соблюдаете диету – количество лептина снижается, что приводит к повышенному аппетиту, для того чтобы сохранить или же восстановить энергетические запасы жиров. Именно по этой причине, некоторые атлеты могут максимально снижать калорийность своего рациона и увеличивать силовую нагрузку, при этом вес тела изменяться не будет, потому что организм старается поддерживать постоянное состояние (гомеостаз). Поэтому, иногда, чтобы сдвинуть гомеостаз с контрольной точки, приходится сильно ограничивать свой рацион. Сдвинуть контрольную точку и увеличить выделение лептина помогают аминокислоты BCAA. Они как бы обманывают организм: заставляют его думать, что в него поступает калорийная пища. Значит, употребление BCAA приводит к подавлению аппетита, увеличению расхода калорий за счет сжигания жиров, повышению метаболизма, и главное к защите мышечной массы от разрушения.

Когда лучше всего принимать комплекс аминокислот BCCA

При похудении аминокислоты необходимо принимать перед тренировкой и сразу после тренировки, растворимые формы – во время тренинга. Помимо этого, при похудении, BCCA рекомендуется принимать и в перерывах между приемами пищи, с целью подавления процесса разрушения мышц и аппетита.

При наборе мышечной массы самое подходящее время для приема аминокислот BCAA – это перед тренингом, во время и сразу после тренинга. Настоятельно рекомендуется готовить энергетический напиток: растворить порцию BCAA и пару ложек сахара в профильтрованной воде. Это обеспечит постоянное поступление углеводов, аминокислот и жидкости в кровь на протяжении всей тренировки. Также можно принять порцию BCAA сразу после сна, чтобы подавить утреннее разрушение мышц. Кроме того, исследования показали – аминокислоты BCAA остаются эффективными даже после смешивания с протеиновым коктейлем.

Аминокислотный коктейль. Для высокой производительности и восстановления мышц!

Аминокислотный комплекс быстрого действия, обогащенный витамином D.

Незаменимые аминокислоты для наращивания сухой мышечной массы и уменьшения потерь мышечной массы во время сушки!

Сочетание BCAA и глютамина.
Защита и восстановление мышц после изматывающих тренировок!

В каких дозах лучше всего принимать аминокислоты BCAA

Как при наборе мышечной массы, так и при похудении, нормальная доза данного комплекса аминокислот составляет 4-8 г. Меньшее потребление BCAA тоже эффективно, но полученные аминокислоты уже не смогут полностью покрыть потребность организма. Сегодня некоторые производители обманывают, и выпускают BCAA в маленьких дозах, хотя стоимость по-прежнему остается высокой. Поэтому не забывайте смотреть размер одной дозы аминокислот и количество порций. Продолжительность употребления комплекса BCAA не ограничена. Перерывы не требуются. Сочетать BCAA можно со всеми видами спортивного питания. Во время набора мышечной массы рекомендуется комбинировать их с протеином, анаболическими комплексами и креатином.

Сочетание комплекса BCAA с другими видами спортивного питания

BCAA может сочетаться с практически любыми видами спортивного питания в бодибилдинге. Использование BCAA в комбинациях с гейнерами или протеинами, а так же креатином и комплексами анаболиков будет эффективно способствовать набору мышечной массы. сочетать практически со всеми видами спортивного питания.

Как проверить качество комплекса аминокислот BCAA

• Чистые, порошковые аминокислоты на воде образуют пленку и почти не растворяются.
  
• На вкус аминокислоты BCAA горькие.
  
• Консистенция и цвет должен соответствовать описанию на лейбле.
  
• Упаковка должна соответствовать заводским стандартам.
  
• Перед покупкой, не забудьте проверить срок годности.

Читайте также

BCAA 2:1:1 10 000 Citrus mix, 100 ml

ВСАА шот с натуральными соками и экстрактами

1 порция, 100 мл

ВСАА – основной материал для построения мышц. Мышечная ткань на 35% состоит из сочетания 3-х веществ: лейцина, изолейцина и валина. Вместе они образуют соединение, получившее название ВСАА – сокращение от branched-chain amino acids (аминокислоты с разветвленными цепочками). Этот комплекс является основным компонентом мышечного белка.

Аминокислоты ВСАА не синтезируются организмом. Они поступают вместе с пищей и специальными добавками. При этом комплекс ВСАА 2:1:1 10 000 Recovery от FLOO SPORT– настоящее «топливо» для спортсмена. Он заметно улучшает спортивные показатели, а также здоровье в целом, поскольку сокращается количество микротравм – небольших разрывов мышц, неизбежных при любых интенсивных тренировках.
Концентрация ВСАА особенно быстро снижается у спортсменов из-за высокой нагрузки на мышцы. Чтобы восстановить нужную концентрацию, организм начинает разрушать мышцы. Это происходит как во время, так и после тренировок. Напиток с содержанием аминокислот ВСАА 2:1:1 10 000 Recovery от FLOO SPORT позволяет предотвратить разрушение. Он очень быстро усваивается, поэтому можно своевременно восполнить аминокислоты.
Лейцин в составе комплекса позволяет эффективно использовать ВСАА для похудения в дополнение к диете. Организм получает сигнал – количество калорий в рационе не снижено. Это важно, потому что обычная диета не влияет на выброс гормона насыщения – лептина. Лейцин увеличивает количество лептина. Из-за этого реже возникает чувство голода, несмотря на низкокалорийный рацион.
Напиток ВСАА 2:1:1 10 000 Recovery от FLOO SPORT – это три аминокислоты в идеальном сочетании. Совместный прием этих веществ производит максимальный эффект. В напитке также содержится витамин С – антиоксидант, необходимый для восстановления мышц, нормальной циркуляции крови и поддержания иммунитета.

Состав: подготовленная столовая минеральная вода, ВСАА 2:1:1(L-лейцин, L-валин, L-изойлецин), концентрированный сок лимон, регулятор кислотности — лимонная кислота, консерванты: сорбат калия, бензоат натрия, подсластитель сукралоза, аскорбиновая кислота, содержит натуральные экстракт: грейпфрут и лемонграсс. Минимальное содержание сока 5%.

Сок лимона — содержит в себе наибольшее количество витамина С, кроме того витамины Е, РР и группы В, а также соли калия, кальция, натрия, магния, железо, цинк, марганец и множество других микроэлементов.Укрепляет иммунитет, помогает бороться с инфекционными заболеваниями, укрепляет стенки сосудов, помогает бороться с усталостью и ослабленностью организма, поддерживает психическое равновесие, восполняет витаминно-минеральные запасы в организме, повышает работоспособность, жизненный тонус и улучшает настроение. Полезен при заболеваниях сердца и сосудов, нормализуется уровень холестерина, понижает артериальное давление. Способствует лучшему усвоению железа.

    Экстракт грейпфрута — это альтернатива антибиотикам и лекарство от многих заболеваний. Способствует уничтожению бактерий и вирусов, развивает в организме устойчивость к возбудителям болезней, не нарушая микрофлору кишечника. Помогает от пищевых отравлений и растворяет отложения холестерина, препятствуя образованию тромбов.

   Экстракт лемонграсса — ускоряет обмен веществ, снижает повышенную температуру тела, применяется как антидепрессант, помогает при нарушениях сна и стрессах, обладает противовоспалительным эффектом и естественными антисептическими свойствами. Помогает для концентрации внимания и улучшения умственной деятельности.

Энергетическая ценность продукта в 100 мл (порция): 

Ккал / кДж 4,8 / 20.

Способ применения: перед применением бутылку тщательно встряхнуть, отмерить мерным колпачком порцию продукта — 50 мл, растворить в 150 мл воды, размешать и выпить. Следует принимать непосредственно перед тренировкой, во время тренировки (если тренировка длиться более часа) сразу после нее и если день без тренировки, то с утра между приемами пищи.

Противопоказания: индивидуальная непереносимость компонентов продукта. Не рекомендуется употребление детьми в возрасте до 18 лет, при беременности и кормлении грудью. Не является лекарственным средством.

Срок хранения: 18 месяцев с даты изготовления. Хранить при температуре не ниже 0 °С и не выше 22 °С без прямого попадания солнечных лучей. *В связи с использованием натуральных ингредиентов, допускается выпадение осадка и наличие частиц растительного происхождения, перед использованием интенсивно взболтать.

Химический анализ белков | Thermo Fisher Scientific

Большинство колориметрических методов анализа белков можно разделить на две группы в зависимости от типа химии: те, которые включают хелатирование белок-медь с вторичным обнаружением восстановленной меди, и методы, основанные на связывании белка с красителем с прямым обнаружением изменения цвета, связанного с связанный краситель.

Большинство коммерческих реагентов для анализа белка — это хорошо охарактеризованные, надежные продукты, обеспечивающие последовательные и надежные результаты.Тем не менее, каждый реагент для анализа имеет свои ограничения; базовое понимание химического состава каждого типа анализа необходимо для выбора подходящего метода для данного образца и правильной оценки результатов.

Аналитический состав на основе меди

Пептиды и биуретовая реакция

Анализы белков на основе меди, включая методы BCA и Лоури, зависят от хорошо известной «реакции биурета», при которой пептиды, содержащие три или более аминокислотных остатка, образуют окрашенный хелатный комплекс с ионами двухвалентной меди (Cu2 +) в щелочной среде, содержащей тартрат натрия-калия.Эта реакция стала известна как реакция биурета, потому что она химически подобна комплексу, который образуется с органическим соединением биурета (Nh3-CO-NH-CO-Nh3) и ионом двухвалентной меди. Биурет, продукт избытка мочевины и тепла, реагирует с медью с образованием светло-голубого тетрадентатного комплекса.

Рисунок 1.Схема реакции биурета. При восстановлении иона меди из двухвалентной меди в одновалентную форму реакция дает слабый сине-фиолетовый цвет.

Рисунок 2.Структуры мочевины, биурета и пептида. Поскольку полипептиды имеют структуру, аналогичную биурету, они могут образовывать комплекс с медью в результате реакции биурета.

Отдельные аминокислоты и дипептиды не вызывают биуретовой реакции, но трипептиды и более крупные полипептиды или белки будут реагировать с образованием комплекса от голубого до фиолетового, который поглощает свет с длиной волны 540 нм.Один ион меди образует цветной координационный комплекс с четырьмя-шестью соседними пептидными связями. Интенсивность окрашивания пропорциональна количеству пептидных связей, участвующих в реакции. Таким образом, биуретовая реакция является основой простого и быстрого одноименного колориметрического реагента для количественного определения общей концентрации белка. Рабочий диапазон анализа биурета составляет 5–160 мг / мл, что подходит для некоторых типов промышленных применений, но недостаточно чувствительно для большинства потребностей в исследованиях белков.

Анализ белка бицинхониновой кислоты (BCA)

BCA Protein Assay был введен Smith, et al., в 1985 году. С тех пор он стал наиболее популярным методом колориметрического определения и количественного определения общего белка.Одно из особых преимуществ заключается в том, что, в отличие от других методов, доступных в то время (например, анализов Брэдфорда и Лоури), анализ белка BCA совместим с образцами, которые содержат до 5% поверхностно-активных веществ (детергентов). Кроме того, анализ BCA более равномерно реагирует на различные белки, чем метод Брэдфорда.

BCA Protein Assay объединяет индуцированную белком реакцию биурета (см. Выше) с высокочувствительным и селективным колориметрическим детектированием образующегося катиона одновалентной меди (Cu1 +) с помощью бицинхониновой кислоты (BCA).Таким образом, речь идет о двух шагах. Во-первых, это реакция биурета, слабый синий цвет которой является результатом восстановления иона двухвалентной меди до иона меди. Во-вторых, это хелатирование BCA с ионом меди, в результате чего получается интенсивный пурпурный цвет. Продукт реакции пурпурного цвета образуется при хелатировании двух молекул BCA с одним ионом меди. Комплекс BCA / медь растворим в воде и демонстрирует сильное линейное поглощение при 562 нм при увеличении концентрации белка. Пурпурный цвет можно измерить на любой длине волны от 550 до 570 нм с минимальной (менее 10%) потерей сигнала.Реагент BCA примерно в 100 раз более чувствителен (нижний предел обнаружения), чем реагент биурета.

Рисунок 3.Реакция BCA с ионом меди. Две молекулы BCA связываются с каждой молекулой меди, которая была восстановлена ​​пептидно-опосредованной реакцией биурета.

Реакция, которая приводит к образованию цвета BCA в результате восстановления Cu2 +, особенно зависит от присутствия трех определенных аминокислотных остатков в белках: цистеина / цистина, тирозина и триптофана.По-видимому, эти аминокислоты независимо усиливают восстановление меди в реакции биурета, тем самым вызывая образование окрашенного хелата BCA-Cu1 +. Однако исследования, проведенные с ди- и трипептидами, показывают, что они производят больше цвета, чем можно объяснить четырьмя отдельными BCA-реактивными аминокислотами. Другими словами, пептидный каркас (и, следовательно, общее количество белка) вносит основной вклад в снижение содержания меди в реакции биурета и развитие окраски в анализе BCA.Незначительное межбелковое различие в анализе белка BCA является результатом различий между белками в составе этих трех аминокислот.

Связывание BCA с ионом одновалентной меди эффективно удаляет слабохелатированные пептиды реакции биурета. Эти пептидные группы затем могут свободно связываться с другой молекулой иона двухвалентной меди. Следовательно, если бицинхониновая кислота и медь присутствуют в большом избытке (как они всегда присутствуют в реагентах для анализа белка BCA), анализ белка не достигает конечной точки.Кроме того, скорость цветообразования BCA зависит от температуры инкубации. Следовательно, ключом к получению точных результатов с помощью метода анализа BCA является одновременный анализ стандартов и неизвестных образцов, чтобы они оба получали одинаковое время инкубации и температуру. Предполагая, что анализ проводится таким образом, характеристика анализа позволяет ускорить проявление или дольше ждать появления желаемого цвета по мере необходимости.

Вещества, снижающие содержание меди, также будут давать цвет в анализе BCA, таким образом влияя на точность количественного определения белка.Реагенты, которые хелатируют медь, также мешают, уменьшая количество цвета BCA, производимого с белком. Некоторые отдельные аминокислоты (цистеин или цистин, тирозин и триптофан) также будут окрашивать и мешать анализу BCA. Технические советы и специализированные версии продуктов для анализа белков BCA решают ту или иную из этих проблем несовместимости образцов.

Последним достижением в колориметрических белковых анализах является анализ белков BCA от Pierce Rapid Gold, который сохраняет высокую чувствительность и линейность традиционного анализа BCA, но обеспечивает готовые к считыванию результаты в течение 5 минут при инкубации при комнатной температуре (RT).Напротив, с традиционными анализами BCA — в зависимости от протокола — время инкубации составляет от 30 минут до 2 часов с температурой от 37 ° C до 60 ^₀ ° C.

Как и обычный анализ BCA, анализ белка BCA Pierce Rapid Gold включает восстановление меди белками в щелочной среде (реакция биурета) для получения чувствительного и селективного колориметрического определения с помощью нового хелатора меди. Количество восстановленной меди пропорционально количеству белка, присутствующего в растворе.Селективный хелатор меди образует комплекс оранжевого и золотого цвета, который сильно поглощает свет с длиной волны 480 нм. Эти репрезентативные данные сравнивают эффективность традиционных и недавно адаптированных анализов белка BCA.

Рисунок 4.Определение концентрации белка в лизатах с использованием стандартных тестов Pierce BCA Protein Assay и Pierce Rapid Gold BCA Protein Assay. Оба анализа были проведены в соответствии с протоколами производителя в формате микропланшета. Для стандартного анализа BCA 25 мкл образца добавляли к 200 мкл рабочего реагента BCA и инкубировали в течение 30 минут при 37 ° C. Для анализа белка BCA Pierce Rapid Gold 20 мкл образца добавляли к 200 мкл рабочего реагента Pierce Rapid Gold BCA и инкубировали при комнатной температуре в течение 5 минут.

Анализ белка Лоури

Анализ белка Лоури назван в честь Оливера Х.Лоури, который разработал и представил его (Lowry, et al., 1951). Он предложил значительное улучшение по сравнению с предыдущими анализами белка, и его статья стала одним из самых цитируемых источников в научной литературе на многие годы. Модифицированный анализ белка Лоури использует стабильный реагент, который заменяет два нестабильных реагента, описанных Лоури. По сути, анализ представляет собой улучшенный анализ биурета, включающий химию хелатирования меди.

Хотя механизм формирования цвета для анализа Лоури аналогичен механизму формирования цвета для анализа на белок BCA, между ними есть несколько существенных различий.Точный механизм образования окраски в анализе Лоури остается плохо изученным. Анализ проводится в два отдельных этапа. Сначала белок реагирует со щелочным сульфатом меди в присутствии тартрата в течение 10 минут при комнатной температуре. Во время этой инкубации из четырех пептидных связей и одного атома меди образуется тетрадентатный комплекс меди (это «реакция биурета»). Во-вторых, добавляется раствор фосфорно-молибденовой фосфорновольфрамовой кислоты. Это соединение (называемое реагентом фолин-фенол) восстанавливается, давая интенсивный синий цвет.Считается, что усиление цвета происходит, когда тетрадентатный комплекс меди переносит электроны на комплекс фосфомолибден-фосфорновольфрамовая кислота. Синий цвет продолжает усиливаться в течение 30 минут инкубации при комнатной температуре. Было высказано предположение, что во время 30-минутной инкубации перестройка исходного нестабильного синего комплекса приводит к стабильному конечному синему комплексу, который имеет более высокую абсорбцию (Lowry, et al. 1951; Legler, et al. 1985).

Окончательный синий цвет оптимально измеряется при 750 нм, но его можно измерить на любой длине волны от 650 до 750 нм с небольшой потерей интенсивности цвета.Лучше всего измерять цвет на длине волны 750 нм, поскольку некоторые другие вещества поглощают свет с такой длиной волны.

Рисунок 5.Краткое описание протокола модифицированного анализа белка Лоури.

Для небольших пептидов количество окраски увеличивается с размером пептида. Присутствие любого из пяти аминокислотных остатков (тирозин, триптофан, цистеин, гистидин и аспарагин) в пептиде или белковом каркасе дополнительно усиливает цвет, поскольку они вносят дополнительные восстанавливающие эквиваленты для дальнейшего восстановления комплекса фосфорномолибденовая / фосфорновольфрамовая кислота.За исключением тирозина и триптофана, свободные аминокислоты не будут давать окрашенный продукт с реактивом Лоури; однако можно обнаружить большинство дипептидов. В отсутствие какой-либо из пяти аминокислот, перечисленных выше в основе пептида, белки, содержащие остатки пролина, имеют более низкий цветовой отклик с реагентом Лоури из-за того, что аминокислота препятствует образованию комплексов.

В отличие от анализа BCA, стадия вторичного связывания в методе Лоури не включает отщепление хелата пептид-медь.Таким образом, метод Лоури является эффективным методом анализа конечной точки. Хотя всегда лучше включать внутренние стандарты в любой анализ белка, можно получить разумные оценки белка с помощью этого метода анализа, сравнивая с ранее построенной стандартной кривой.

Протокол требует, чтобы феноловый реагент Folin был добавлен в каждую пробирку точно в конце десятиминутной инкубации. При щелочном pH реагента Лоури фенольный реагент Folin практически сразу инактивируется.Поэтому лучше всего добавлять реагент Folin фенол в точное время, одновременно перемешивая каждую пробирку. Поскольку это несколько обременительно, для получения стабильных результатов требуется некоторая практика. Это также ограничивает общее количество образцов, которые могут быть проанализированы за один цикл. Если используется десятисекундный интервал между пробирками, максимальное количество пробирок, которое может быть проанализировано в течение десяти минут, составляет шестьдесят (10 секунд на пробирку x 60 пробирок = 600 секунд или 10 минут).

Реагент для анализа Лоури образует осадки в присутствии детергентов или ионов калия.Когда причиной являются ионы калия, проблему иногда можно решить путем центрифугирования пробирки и измерения цвета надосадочной жидкости. Большинство поверхностно-активных веществ вызывают осаждение реагента даже при очень низких концентрациях. Единственным исключением является додецилсульфат натрия (SDS), который совместим с реагентом при концентрациях до 1% в образце. Хелатирующие агенты препятствуют связыванию меди и предотвращению образования комплекса медных пептидных связей. Восстанавливающие агенты и свободные тиолы также препятствуют восстановлению комплекса фосфовольфрамат-фосфомолибдат, сразу же образуя продукт интенсивно-синего цвета при их добавлении.

Модифицированный реагент для анализа на белок Лоури необходимо хранить в холодильнике для длительного хранения, но перед использованием его необходимо нагреть до комнатной температуры. Использование холодного модифицированного реагента для анализа белка Лоури приведет к низким значениям абсорбции.

Химический состав на основе красителей

Анализ белка с красителем кумасси (Брэдфорд)

Использование красителя Кумасси G-250 в качестве колориметрического реагента для обнаружения и количественного определения общего белка было впервые описано доктором Дж.Мэрион Брэдфорд в 1976 году (Bradford, 1976). Анализы Thermo Scientific Pierce Coomassie (Bradford) — это варианты реагента, о которых впервые сообщил Брэдфорд.

Рисунок 6.Химическая структура красителя Кумасси. Эта коллоидная форма красителя Кумасси, созданная в буфере фосфорной кислоты с низким pH, является основой для реагентов для анализа белка Брэдфорда.

В кислой среде реагента белок связывается с красителем Кумасси.Это приводит к спектральному сдвигу от красновато-коричневой формы красителя (максимум поглощения при 465 нм) к синей форме красителя (максимум поглощения при 610 нм). Разница между двумя формами красителя наибольшая при 595 нм, так что это оптимальная длина волны для измерения синего цвета комплекса краситель-белок кумасси. При желании синий цвет можно измерить на любой длине волны от 575 нм до 615 нм. На двух крайних участках (575 нм и 615 нм) наблюдается потеря около 10% измеренного количества цвета (поглощения) по сравнению с полученным при 595 нм.

Развитие окраски в анализах протеина Брэдфорда связано с присутствием в протеине определенных основных аминокислот (в первую очередь аргинина, лизина и гистидина). Силы Ван-дер-Ваальса и гидрофобные взаимодействия также участвуют в связывании красителя белком. Количество лигандов красителя Кумасси, связанных с каждой молекулой белка, приблизительно пропорционально количеству положительных зарядов, обнаруженных на белке. Свободные аминокислоты, пептиды и белки с низким молекулярным весом не окрашивают реагенты красителя кумасси.Как правило, масса пептида или белка должна составлять не менее 3000 дальтон, чтобы его можно было обнаружить с помощью этого реагента. В некоторых приложениях это может быть преимуществом. Например, анализ белка кумасси использовался для измерения «высокомолекулярных белков» во время ферментации в пивоваренной промышленности.

Анализ связывания красителя кумасси является самым быстрым и простым для выполнения из всех анализов белка. Анализ проводится при комнатной температуре и не требует специального оборудования. Стандартные и неизвестные образцы добавляют в пробирки, содержащие предварительно приготовленный реагент для анализа Кумасси, и полученный синий цвет измеряется при 595 нм после короткой инкубации при комнатной температуре.Анализы белков, содержащих краситель кумасси, совместимы с большинством солей, растворителей, буферов, тиолов, восстанавливающих веществ и хелатирующих агентов металлов, встречающихся в образцах белков.

Основным недостатком протеинов на основе Кумасси является их несовместимость с поверхностно-активными веществами в концентрациях, обычно используемых для солюбилизации мембранных протеинов. Как правило, присутствие поверхностно-активного вещества в образце даже при низких концентрациях вызывает осаждение реагента. Кроме того, реагент красителя Кумасси очень кислый, поэтому белки с плохой растворимостью в кислоте не могут быть проанализированы с помощью этого реагента.Наконец, реагенты кумасси приводят к примерно в два раза большему изменению соотношения между белками, чем реагенты для анализа на основе хелатирования меди.

Рисунок 7.Спектры поглощения стандартов белка в Thermo Scientific Pierce Coomassie Plus (Bradford) Protein Assay . Стандарты белка: 0, 125, 250, 500, 750, 1000, 1500 и 2000 мкг / мл бычьего сывороточного альбумина соответственно. Линия 2000 мкг / мл проведена толще, чем другие, для ориентации последовательности. Обратите внимание, что обратная зависимость между концентрацией белка и оптической плотностью наблюдается ниже 525 нм (максимум при 465 нм).

Готовые к использованию жидкие реагенты красителя кумасси следует осторожно перемешать путем переворачивания непосредственно перед использованием.Краситель в этих жидких реагентах образует рыхлые агрегаты в течение 60 минут в невозмущенных растворах. Осторожное перемешивание реагента путем переворачивания флакона равномерно диспергирует краситель и гарантирует однородность аликвот. После связывания с белком краситель также образует агрегаты белок-краситель. К счастью, эти агрегаты белок-краситель можно легко диспергировать, перемешивая реакционную трубку. Это характерно для всех жидких реагентов на основе красителя кумасси. Поскольку эти агрегаты образуются относительно быстро, также лучше всего регулярно перемешивать (перемешивать в течение 2-3 секунд) каждую пробирку или пластину непосредственно перед измерением цвета.

Анализ белка Pierce 660 нм

Представленный в 2008 году анализатор белка 660 нм Thermo Scientific Pierce представляет собой реагент на основе красителя, который обеспечивает такое же удобство, как и тесты на основе кумасси, но преодолевает ряд их недостатков.В частности, анализ Pierce 660 нм совместим с большинством детергентов и дает более линейную кривую отклика.

Подробный химический анализ является патентованным, но основной механизм можно резюмировать следующим образом. Реагент содержит запатентованный комплекс краситель-металл в кислотном буфере. Комплекс краситель-металл связывается с белком в кислой среде, вызывая сдвиг максимума поглощения красителя, который измеряется при 660 нм. Реагент имеет красновато-коричневый цвет и меняет цвет на зеленый при связывании с белком.

Рисунок 8.Максимум поглощения комплекса реагент-металл с длиной волны 660 нм сдвигается пропорционально при связывании с БСА. Спектры поглощения регистрировали для реагента для анализа белка Pierce 660 нм в диапазоне от 340 до 800 нм с использованием спектрофотометра. Белок в присутствии комплекса реагент-металл вызывает значительный сдвиг оптической плотности на длине волны 660 нм.

Цвет, полученный в анализе, является стабильным и увеличивается пропорционально широкому диапазону увеличения концентрации белка.Изменение цвета происходит за счет депротонирования красителя при низком pH, чему способствуют белковые взаимодействия через положительно заряженные аминокислотные группы и отрицательно заряженный депротонированный комплекс краситель-металл.

Анализ связывается с белками аналогично красителю Кумасси. Таким образом, он имеет такую ​​же вариабельность от белка к белку, что и методы анализа Кумасси (Брэдфорд). Однако, в отличие от анализов на основе Кумасси, анализ протеина Pierce 660 нм полностью совместим с неионогенными детергентами, обычно используемыми в образцах протеина.Фактически, при использовании с реагентом для совместимости с ионными детергентами (IDCR), анализ Pierce 660 нм также совместим с образцом, содержащим буфер образца Laemmli SDS с бромфеноловым синим и другими буферами, содержащими обычные ионные детергенты.

Флуоресцентный анализ белка

Методы определения количества белка на основе флуоресценции обеспечивают превосходную чувствительность, что означает, что для количественного определения используется меньше образца белка, оставляя больше образцов для экспериментов.Для описанных ниже анализов требуется несколько этапов, и время не имеет решающего значения, поскольку продолжительность сигнала обычно составляет часы, поэтому анализы могут быть адаптированы для автоматизированной обработки в высокопроизводительных приложениях. Сигнал флуоресценции можно обнаружить с помощью флуориметра или считывающего устройства для микропланшетов.

Флуоресцентный анализ белка обычно обеспечивает исследователей большей чувствительностью, чем то, что можно измерить с помощью колориметрического анализа белка. Анализы белков Thermo Scientific Quanti-iT, Qubit и NanoOrange основаны на связывании молекулы красителя с детергентным покрытием на белках и гидрофобных областях белков, что приводит к флуоресценции, в то время как несвязанный краситель не является флуоресцентным.Длина волны обнаружения для всех трех анализов составляет 470/570 нм. Первые два дают квазилинейную стандартную кривую от 0,5 до 4 мкг в образце 200 мкл с объемом образца 1-20 мкл, в то время как NanoOrange имеет более низкий диапазон чувствительности от 10 нг / мл до 10 мкг / мл. Для обнаружения липопротеинов или белков в сложной липидной среде можно использовать набор CBQCA Protein Quantitation Kit. Эти репрезентативные данные показывают типичную стандартную кривую, полученную с использованием набора для анализа флуоресцентного белка.

Рисунок 9.Низкое межбелковое различие в тесте Qubit Protein Assay.

Набор для количественного определения белка NanoOrange содержит очень чувствительный и простой анализ для количественного определения белка с обнаружением всего 10 нг / мл белка в растворе. Этот флуоресцентный краситель подходит для использования со спектрофлуорометрами и считывающими устройствами для микропланшетов.Для обнаружения липопротеинов или белков в сложной липидной среде воспользуйтесь нашим набором для количественного определения белков CBQCA.

Набор CBQCA Protein Quantitation Kit — это очень чувствительный анализ для количественного определения белков в растворе, способный определять даже 10 нг белка на мл. По чувствительности, аналогичной нашему реагенту для количественного определения белка NanoOrange (N-6666), CBQCA лучше подходит для точного количественного определения белков в присутствии липидов, мембранных фракций или детергентов, а также для липопротеинов и небольших пептидов.Этот анализ основан на реакции красителя с первичными аминогруппами в присутствии цианида или тиолов, в результате чего краситель становится флуоресцентным. Непрореагировавший краситель остается нефлуоресцентным. Этот анализ белка может обнаруживать белки в диапазоне от 10 нг / мл до 150 мкг / мл.

Наконец, набор EZQ Protein Quantitation Kit обеспечивает анализ белков на основе флуоресценции, который облегчает быстрое количественное определение образцов белка, подготовленных для гель-электрофореза. Анализ основан на электростатическом связывании красителя с основными аминокислотами, дополненном дополнительными гидрофобными взаимодействиями, что приводит к флуоресценции, которую можно считывать при 280 нм и 450/618 нм.

Обнаружение флуоресцентного белка

Флуорометры — это инструменты, которые измеряют интенсивность флуоресцентного сигнала от красителей, прикрепленных к биологическим молекулам, а также от естественно флуоресцентных молекул на основе длин волн возбуждения (Ex) и излучения (Em).Флуорометры были разработаны для количественного определения, обнаружения и мониторинга аналитов и их реакций с высокой степенью чувствительности и специфичности.

Флуорометр Invitrogen Qubit — настольное устройство, которое точно измеряет ДНК, РНК и белок с помощью высокочувствительных количественных анализов Qubit. В сочетании с оптимизированными алгоритмами флуориметр Qubit 3 использует флуоресцентные красители, которые производят сигнал только при привязке к интересующей цели, тем самым сводя к минимуму влияние загрязняющих веществ, включая деградированную ДНК или РНК, на результаты экспериментов.

Рекомендуемая литература

1. Брэдфорд, ММ. (1976) Быстрый и чувствительный метод количественного определения количества белка в микрограммах, использующий принцип связывания белок-краситель.Аналитическая биохимия. 72, 248-254.
2. Смит П.К., Крон Р.И., Хермансон Г.Т. и др. (1987) Измерение белка с использованием бицинхониновой кислоты. Аналитическая биохимия. 150, 76-85.
3. Крон, Р.И. (2002). Колориметрическое обнаружение и количественное определение общего белка, Текущие протоколы в клеточной биологии, A.3H.1-A.3H.28, John Wiley & Sons, Inc.,
4. Крон, Р.И. (2001). Колориметрическое определение общего белка, текущие протоколы аналитической химии пищевых продуктов, B1.1.1-B1.1.27, John Wiley & Sons, Inc.,
5. Lowry, O.H., Rosebrough, N.J., Farr, A.L., et al. (1951) Измерение белка с помощью реагента фолин-фенол. Журнал биологической химии. 193, 265-75.
6. Legler G, Müller-Platz CM, Mentges-Hettkamp M, et al. (1985) На химической основе определения белка Лоури. Аналитическая биохимия. 150, 278-87.

Статьи по Теме

Различия между анализом белков BCA и Bradford, какой метод лучше?

Все наши исходные материалы для аллергенов будут поставляться с сертификатом анализа, в котором указано содержание белка (мг / г).Для полной картины мы показываем содержание протеина в наших сертификатах по результатам двух анализов определения протеина; анализ белка BCA (бицинхониновая кислота) и анализ белка Брэдфорда:

Каковы недостатки и преимущества этих двух анализов белка? На этой странице больше информации о методах анализа белков BCA и Брэдфорда.

Какой способ лучше?

Не существует метода анализа белков, который был бы полностью специфичен для белков или одинаково чувствителен ко всем типам белков.Следовательно, успешное использование анализов белка включает выбор метода, который наиболее совместим с анализируемыми образцами, выбор подходящего стандарта анализа, а также понимание и контроль конкретных допущений и ограничений, которые остаются. Исторически метод BCA более чувствителен, чем метод Брэдфорда, потому что первый метод основан на хелатировании белок-медь и вторичном обнаружении восстановленной меди. В то время как метод Брэдфорда основан на связывании белок-краситель и изменении цвета от 465 до 595 нм.Этот метод фактически измеряет присутствие основных аминокислотных остатков, аргинина, лизина и гистидина, что способствует образованию комплекса белок-краситель. Содержание аргинина, лизина и гистидина в Der p 1 низкое (около 10%).

Связаться с нами

Анализ белка BCA (бицинхониновая кислота)

Анализ белка BCA (бицинхонинового) — это широко используемый метод колориметрического определения и количественного определения общего белка в растворе. Анализ белка BCA — это анализ белка на основе меди, также известный как анализ Смита, потому что он был введен Полом К.Смит и др. В 1985 году. Одним из самых больших преимуществ этого метода является то, что анализ белка BCA совместим с большинством образцов белка и образцов белка, которые содержат до 5% поверхностно-активных веществ (детергентов). Кроме того, анализ BCA более равномерно реагирует на различные белки, чем метод Брэдфорда.

Анализ BCA основан на традиционном анализе Лоури, за исключением того, что используется бицинхониновая кислота. Анализ состоит из двух этапов. Во-первых, это реакция биурета, слабый синий цвет которой является результатом восстановления иона двухвалентной меди до иона меди.Во-вторых, это хелатирование BCA с ионом меди, в результате чего получается интенсивный пурпурный цвет. Продукт реакции пурпурного цвета образуется при хелатировании двух молекул BCA с одним ионом меди. Комплекс BCA / медь растворим в воде и демонстрирует сильное линейное поглощение при 562 нм при увеличении концентрации белка. Пурпурный цвет можно измерить на любой длине волны от 550 нм до 570 нм с минимальной (менее 10%) потерей сигнала. BCA чувствителен и имеет широкий динамический диапазон; способен измерять концентрацию белка 0.От 5 мкг / мл до 1,5 мг / мл. Преимущество BCA заключается в том, что реагент довольно стабилен в щелочных условиях и может быть включен в раствор меди, что позволяет проводить одностадийную процедуру.

Вещества, снижающие содержание меди, также будут давать цвет в анализе BCA, что влияет на точность количественного определения белка. Реагенты, которые хелатируют медь, также мешают, уменьшая количество цвета BCA, производимого с белком. Некоторые отдельные аминокислоты (такие как цистеин или цистин, тирозин и триптофан) также будут окрашивать и мешать анализу BCA.Анализ BCA несовместим с восстановителями. Анализ BCA имеет много преимуществ по сравнению с другими методами определения белка.

Преимущества анализа белка BCA

• Цветовой комплекс устойчивый
• Меньшая восприимчивость к моющим средствам
• Он применим в широком диапазоне концентраций белка
• Высокочувствительный анализ BCA
• Он совместим с широким спектром ионных и неионных детергентов, а также денатурирующих агентов
• Он способен обеспечить большую однородность белка к белку, поскольку на него не сильно влияют различия в составе белка.
• Его можно использовать для оценки выхода лизатов целых клеток и фракций аффинной колонки.

Недостатки анализа белка BCA

• Реакция может быть менее чувствительной к типу аминокислот, присутствующих в растворе, но на реакцию влияют остатки цистеина, тирозина и триптофана. Присутствие этих аминокислот приведет к окрашиванию, которое может повлиять на ваши результаты.
• Присутствие в буфере восстанавливающих агентов, хелатирующих агентов меди, подкислителей, восстанавливающих сахаров, липидов и фосфолипидов также может повлиять на точность результатов.
• Интерпретация ваших результатов зависит от стандартной кривой для известного образца белка. Таким образом, для получения точных результатов необходимо одновременно анализировать образцы и известные белки, используя одинаковую температуру и время инкубации.
• Для анализа необходимо приготовить рабочий раствор из поставляемых реагентов.
• Для разработки анализа требуются длительные инкубации от 30 минут до 2 часов.

Анализ белка Брэдфорда

Анализ Брэдфорда является самым быстрым и простым для выполнения среди анализов белка и использует примерно такое же количество белка, что и анализ Лоури.Он также совместим с большинством солей, растворителей, буферов, тиолов, восстанавливающих веществ и хелатирующих агентов металлов. Он довольно точен, и образцы, которые находятся за пределами диапазона, можно повторно проверить в течение нескольких минут. Bradford рекомендуется для общего использования, особенно для определения содержания белка в клеточных фракциях и оценки концентрации белка для гель-электрофореза.

Метод Брэдфорда — это анализ на основе красителя, основанный на способности кумасси синего связывать белок, заставляя краситель переходить от красного цвета к синему.Использование красителя Кумасси G-250 в качестве колориметрического реагента для обнаружения и количественного определения общего белка было впервые описано доктором Марион Брэдфорд в 1976 году (Bradford, 1976). В кислой среде реагента белок связывается с красителем кумасси. Это приводит к спектральному сдвигу от красновато-коричневой формы красителя (максимум поглощения при 465 нм) к синей форме красителя (максимум поглощения при 610 нм). Разница между двумя формами красителя наибольшая при 595 нм, так что это оптимальная длина волны для измерения синего цвета комплекса краситель-белок кумасси.При желании синий цвет можно измерить на любой длине волны от 575 нм до 615 нм. Анализ Брэдфорда выполняется быстро — образцы можно считывать через 5 минут после добавления красителя в образец.

Многим нравится анализ Брэдфорда, потому что меньшее количество веществ мешает анализу, за заметным исключением высоких концентраций некоторых детергентов, что может быть проблемой, если вам требуется много детергента для лизирования клеток. Образцы белка обычно содержат соли, растворители, буферы, консерванты, восстановители и хелатирующие агенты с металлами.Эти молекулы часто используются для солюбилизации и стабилизации белков. Другие анализы белка, такие как BCA и Lowry, неэффективны, потому что молекулы, такие как восстановители, мешают анализу. Использование Брэдфорда может быть выгодным по сравнению с этими молекулами, потому что они совместимы друг с другом и не будут мешать. Однако он совместим только с моющими средствами низкой концентрации. Если анализируемый образец белка содержит детергенты в буфере, рекомендуется использовать процедуру определения белка BCA.Анализы белков, содержащих краситель кумасси, совместимы с большинством солей, растворителей, буферов, тиолов, восстанавливающих веществ и хелатирующих агентов металлов, встречающихся в образцах белков.

Образцы белка обычно содержат соли, растворители, буферы, консерванты, восстановители и хелатирующие агенты с металлами. Эти молекулы часто используются для солюбилизации и стабилизации белков. Другие анализы белка, такие как BCA и Lowry, неэффективны, потому что молекулы, такие как восстановители, мешают анализу.Использование Брэдфорда может быть выгодным по сравнению с этими молекулами, потому что они совместимы друг с другом и не будут мешать.

Преимущества анализа белка Брэдфорда

• Самым большим преимуществом этого метода является скорость. Весь процесс занимает около получаса. Это позволяет вам протестировать несколько образцов за короткий промежуток времени.
• Другие анализы белка, такие как BCA и Lowry, неэффективны, потому что молекулы, такие как восстановители, мешают анализу. Использование Брэдфорда может быть выгодным по сравнению с этими молекулами, потому что они совместимы друг с другом и не будут мешать
• В тесте используется видимый свет (вместо УФ-света) для измерения оптической плотности образца.Таким образом, вам не понадобится УФ-спектрофотометр, но вы можете использовать простой спектрофотометр видимого света.
• Анализ Брэдфорда способен обнаруживать широкий спектр белков, обнаруживая их в количествах от 1 до 20 мкг.
• Это чрезвычайно чувствительный и очень простой метод: измерение OD при 595 нм после 5 минут инкубации.

Недостатки анализа белка Брэдфорда

• Несовместимость с поверхностно-активными веществами в концентрациях, обычно используемых для растворения мембранных белков.Как правило, присутствие поверхностно-активного вещества в образце даже при низких концентрациях вызывает осаждение реагента.
• Реагент красителя Брэдфорда очень кислый, поэтому белки с плохой растворимостью в кислоте не могут быть проанализированы с помощью этого реагента.
• Наконец, реагенты Брэдфорда приводят к примерно вдвое большему изменению соотношения между белками, чем реагенты для анализа на основе хелатирования меди.
• Анализ Брэдфорда является линейным в коротком диапазоне, обычно от 0 мкг / мл до 2000 мкг / мл, что часто требует разбавления пробы перед анализом.При выполнении этих разведений ошибка одного разведения усугубляется в последующих разведениях, что приводит к линейной зависимости, которая не всегда может быть точной.

Сравнение количественных анализов белка для биофармацевтических применений

1.

Спецификации: процедуры испытаний и критерии приемлемости для биотехнологических / биологических продуктов (Q6B) (1999). Международная конференция по гармонизации технических требований к регистрации фармацевтических препаратов для человека (стр.1–16).

2.

Келли, С. М., и Прайс, Н. К. (2000). Использование кругового дихроизма в исследовании структуры и функции белков . Current Protein & Peptide Science, 1 (4), 349–384.

Артикул CAS Google ученый

3.

Blakeley, R. L., & Zerner, B. (1975). Точное гравиметрическое определение концентрации чистых белков и удельной активности ферментов . Методы в энзимологии, 35 , 221–226.

PubMed CAS Google ученый

4.

Андерс, Дж. К., Партен, Б. Ф., Петри, Г. Э., Марлоу, Р. Л., и МакЭнтайр, Дж. Э. (2003). Использование аминокислотного анализа для определения констант абсорбционной способности . BioPharm International (февраль) , 2 , 30–37.

5.

Гилл, С.К., и фон Хиппель, П. Х. (1989). Расчет коэффициентов экстинкции белков по данным аминокислотной последовательности Analytical Biochemistry, 182 (2), 319–326.

PubMed Статья CAS Google ученый

6.

Пейс, К., Вайдос, Ф., Фи, Л., Гримсли, Г., и Грей, Т. (1995). Как измерить и предсказать молярный коэффициент поглощения белка? . Protein Science, 4 (11), 2411–2423.

PubMed CAS Статья Google ученый

7.

Сапан, К. В., Лундблад, Р. Л., и Прайс, Н. С. (1999) Методики колориметрического анализа белков . Биотехнология, прикладная биохимия, 29 (Pt 2), 99–108.

CAS Google ученый

8.

Lundblad, R. L., & Price, N. C. (2004) Определение концентрации белка . Bioprocess International, 2 (1), 38–46.

CAS Google ученый

9.

Fountoulakis, M., Juranville, J. F., & Manneberg, M. (1992) Сравнение анализов Кумасси бриллиантового синего, бицинхониновой кислоты и количественного анализа Лоури с использованием негликозилированных и гликозилированных белков . Журнал биохимических и биофизических методов, 24 (3–4), 265–274.

PubMed CAS Google ученый

10.

Альтерман М., Чин Д. Т., Харрис Р., Хунцикер П., Линскенс С., Пакман Л. и Шаллер Дж. (2003). Исследование AAARG2003: Количественное определение белков с помощью аминокислотного анализа и колориметрических анализов, в ABRF 2003; Перевод биологии с помощью протеомики и функциональной геномики. Денвер, Колорадо

11.

Методы анализа (2004). Совет Европы (COE) — Европейский директорат по качеству лекарственных средств (стр.138–141).

12.

Барретт Г. К. (1985). Разложение аминокислот, сопровождающее гидролиз белка in vitro. В книге Дж. К. Барретта (ред.). Химия и биохимия аминокислот (стр. 376–398). Лондон: Чепмен и Холл.

13.

Морпурго М. и Веронезе Ф. М. (2004). Конъюгаты пептидов и белков с полиэтиленгликолями . Методы молекулярной биологии, 283 , 45–70.

PubMed CAS Google ученый

14.

Наг А., Митра Г. и Гош П. С. (1996). Колориметрический анализ для оценки полиэтиленгликоля и полиэтиленгликолированного белка с использованием ферротиоцианата аммония. Analytical Biochemistry, 237 (2), 224–231.

PubMed Статья CAS Google ученый

15.

Бантан-Полак, Т., Кассай, М., и Грант, К. Б. (2001). Сравнение флуорогенных реагентов флуорескамина и нафталин-2,3-дикарбоксальдегида для обнаружения аминокислот на микропланшетах Analytical Biochemistry, 297 (2), 128–136.

PubMed Статья CAS Google ученый

16.

Хайндс, К., Кох, Дж. Дж., Джосс, Л., Лю, Ф., Баудис, М., и Ким, С. В. (2000). Синтез и характеристика конъюгатов полиэтиленгликоль-инсулин . Bioconjugate Chemistry, 11 (2), 195–201.

PubMed Статья CAS Google ученый

17.

Учио, Т., Баудис, М., Лю, Ф., Сонг, С. К., и Ким, С. В. (1999). Сайт-специфичные конъюгаты инсулина с повышенной стабильностью и расширенным профилем действия . Advanced Drug Delivery Reviews, 35 (2–3), 289–306.

PubMed Статья CAS Google ученый

18.

Чан, Дж. К., Томпсон, Дж. У., и Гилл, Т. А. (1995). Количественное определение протаминов с помощью анализа G кумасси синего Analytical Biochemistry, 226 (1), 191–193.

PubMed Статья CAS Google ученый

19.

Stoscheck, C.M. (1990). Повышенная однородность реакции анализа белка G кумасси синего на различные белки Analytical Biochemistry, 184 (1), 111–116.

PubMed Статья CAS Google ученый

20.

Найт, М. И., и Чемберс, П. Дж. (2003). Проблемы, связанные с определением концентрации белка: сравнение методов оценки белка . Молекулярная биотехнология, 23 (1), 19–28.

PubMed Статья CAS Google ученый

21.

Haughland, R.P. (2005). Технология обнаружения и протеомики белков. В M. T. Z. Spence (Ed.), Руководство по флуоресцентным зондам и технологиям маркировки (том 10, стр. 413–472) Invitrogen.

22.

Фи, К. Дж., И Ван Алстайн, Дж. М. (2004) Прогнозирование радиуса вязкости и поведения эксклюзионной хроматографии ПЭГ-илированных белков . Bioconjugate Chemistry, 15, (6), 1304–1313.

PubMed Статья CAS Google ученый

23.

Fu, D., Chen, L., & O’Neill, R.A. (1994) Подробная структурная характеристика олигосахаридов рибонуклеазы B с помощью спектроскопии 1H ЯМР и масс-спектрометрии . Исследование углеводов, 261 (2), 173–186.

PubMed Статья CAS Google ученый

24.

Валидация аналитических процедур: текст и методология (Q2 (R1)) (1994). Международная конференция по гармонизации технических требований к регистрации фармацевтических препаратов для человека (стр. 1–13).

25.

Моппер К. и Гиндлер Э. М. (1973) Новый некоррозионный краситель для автоматической сахарной хроматографии Analytical Biochemistry, 56 (2), 440–442.

PubMed Статья CAS Google ученый

Анализ белка бицинхониновой кислоты (BCA) со стандартом белка BSA

Описание

ВВЕДЕНИЕ

Наш анализ белков BCA (бицинхониновая кислота) — это улучшенный, готовый к использованию быстрый колориметрический метод количественного определения общего белка.Это совместимый с моющими средствами состав на основе бицинхониновой кислоты (BCA) для колориметрического определения и количественного определения общего белка. Продукт реакции, окрашенный в пурпурный цвет, образуется в результате хелатирования двух молекул BCA с одним ионом меди. Этот водорастворимый комплекс демонстрирует сильное поглощение при 562 нм, которое почти линейно с увеличением концентрации белка в широком рабочем диапазоне (20-2000 мкг / мл). Сообщается, что макромолекулярная структура белков, количество пептидных связей и присутствие четырех определенных аминокислот (цистеин, цистин, триптофан и тирозин) ответственны за формирование цвета с BCA.Исследования ди-, три- и тетра-пептидов предполагают, что степень образования цвета вызвана чем-то большим, чем простая сумма отдельных функциональных групп, производящих окраску. Соответственно, концентрации белка обычно определяют и сообщают со ссылкой на стандарты обычного белка, такого как бычий сывороточный альбумин (BSA). Из белка готовят серию разведений известной концентрации и анализируют вместе с неизвестными перед тем, как концентрацию каждого неизвестного вещества определяют на основе стандартной кривой.

Представлены две процедуры анализа; Кювета и микропланшет. Из них для процедуры с использованием кюветы требуется больший объем (50 мкл) образца белка; однако, поскольку в нем используется соотношение пробы и рабочего раствора 1:20 (об. / об.), влияние мешающих веществ сводится к минимуму. Процедура микропланшета упрощает работу с образцом, как микропланшет, и требует меньшего объема (10-25 мкл) образца белка; однако, поскольку соотношение пробы к рабочему раствору составляет 1: 8 (об. / об.), он предлагает меньшую гибкость в преодолении мешающих концентраций веществ и получении низких уровней обнаружения.Анализ BCA более чувствителен и применим, чем процедуры биурета или Лоури, и имеет меньшую вариабельность, чем анализ Брэдфорда. Анализ белка BCA демонстрирует более высокую толерантность к обычным мешающим веществам, таким как неионогенные детергенты и буферные соли, чем метод Лоури ¹ . Набор BCA Protein Assay Kit можно использовать для измерения концентрации белка в лизатах или гомогенатах, приготовленных с совместимым буфером для лизиса, в формате микропланшета. Мы рекомендуем использовать реагент и концентрацию, совместимые с BCA, чтобы уменьшить влияние восстанавливающих агентов, хелаторов, детергентов и других общих ингредиентов, содержащихся в большинстве буферов для лизиса.Анализ BCA имеет много преимуществ по сравнению с другими методами определения белка.

Основные характеристики:

• Колориметрический метод и считывание при 562 нм
• Совместим с большинством ионных и неионных моющих средств
• Быстрее и проще, чем метод Лоури
• Рабочий раствор стабильный в течение 24 часов
• Линейный рабочий диапазон для BSA: 20-2000 мкг / мл
• Подходит для микропланшетов
• Менее межбелковые вариации, чем у методов связывания красителей

Состав набора :

Название позиции	Кат.№ 10477	Кат. № 10477-1	Условия хранения *
BCA Реагент A	2 x 250 мл	2 x 500 мл	Комнатная температура
BCA Reagent B	12 мл	1 x 25 мл	Комнатная температура
Стандарт BSA (2 мг / мл)	2 x 5,0 мл	2 x 5,0 мл	4 ° С

Дополнительная информация

Размер	500 анализов / 2500 микроанализов, 1000 анализов / 5000 микроанализов

Анализ общего белка в водорослях с помощью общего определения аминокислот: оптимизация дериватизации аминокислот после гидролиза с помощью O-фталальдегид-3-меркаптопропионовой кислоты (OPA-3MPA) (статья в журнале)

Кучиаро, Джошуа Х.и Лоуренс, Лив М. Анализ общего белка в водорослях с помощью массового определения аминокислот: оптимизация дериватизации аминокислот после гидролиза с помощью O-фталальдегид-3-меркаптопропионовой кислоты (OPA-3MPA) . США: Н. п., 2019. Интернет. DOI: 10.1021 / acs.jafc.9b00884.

Кучиаро, Джошуа Х. и Лауренс, Лив М. Анализ общего белка в водорослях с помощью общего определения аминокислот: оптимизация дериватизации аминокислот после гидролиза с помощью O-фталальдегид-3-меркаптопропионовой кислоты (OPA-3MPA) .Соединенные Штаты. https://doi.org/10.1021/acs.jafc.9b00884

Кучиаро, Джошуа Х. и Лоренс, Лив М. Ср. «Общий анализ белка в водорослях с помощью общего определения аминокислот: Оптимизация дериватизации аминокислот после гидролиза с помощью O-фталальдегид-3-меркаптопропионовой кислоты (OPA-3MPA)». Соединенные Штаты. https://doi.org/10.1021/acs.jafc.9b00884. https: // www.osti.gov/servlets/purl/1514837.

@article {osti_1514837,
title = {Общий анализ белка в водорослях с помощью общего определения аминокислот: оптимизация дериватизации аминокислот после гидролиза с помощью O-фталальдегид-3-меркаптопропионовой кислоты (OPA-3MPA)},
author = {Кучиаро, Джошуа Х. и Лоренс, Лив М.},
abstractNote = {Анализ протеина в биомассе водорослей - одна из наиболее важных областей коммерческой разработки характеристик водорослей для пищевых или других ценных применений.Требуется новый быстрый и точный метод, который может быть широко внедрен и не подвержен влиянию сложной матрицы биомассы водорослей. Мы разработали простой спектрофотометрический метод для количественного определения количества первичных аминокислот в препарате биомассы водорослей, гидролизованной кислотой, в качестве альтернативы более трудоемкому кислотному анализу с помощью амино-ВЭЖХ или менее специфическому превращению азота в белок. Мы проверили метод дериватизации на основе O-фталевого альдегида (OPA), демонстрирующий точное и линейное количественное определение стандартных эталонных аминокислот, а также смесей, имитирующих сложность аминокислот, обнаруженную в биомассе водорослей.Наличие помех, которые могут возникать из-за сложного биохимического состава биомассы, было проверено на этапе валидации метода. Мы документируем применение нового метода дериватизации OPA с 3-меркаптопропионовой кислотой (3MPA) для определения общего содержания аминокислот в собранной биомассе водорослей, собранной в различных контролируемых условиях культивирования, и продемонстрировали точность в пределах 10% по сравнению с эталонным измерением аминокислот. содержание кислоты как минимум в 4 видах и 10 образцах биомассы водорослей на ранних, средних и поздних стадиях культивирования.},
doi = {10.1021 / acs.jafc.9b00884},
url = {https://www.osti.gov/biblio/1514837}, journal = {Журнал сельскохозяйственной и пищевой химии},
issn = {0021-8561},
число = 19,
объем = 67,
place = {United States},
год = {2019},
месяц = ​​{4}
}

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности.Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.

---

Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:

• В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
• Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались.Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
• Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
• Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
• Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie.Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

---

Почему этому сайту требуются файлы cookie?

Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.

---

Что сохраняется в файле cookie?

Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

Как правило, в файлах cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

Почему анализ протеина BCA чрезмерно разрастается

Анализ бицинхрониновой кислоты (BCA), также известный как анализ Смита, представляет собой биохимический анализ, используемый для определения общей концентрации белка в растворе.Благодаря его способности обеспечивать точное определение концентрации белка и его совместимости с большинством типов образцов белка, белковые лаборатории во всем мире предпочитают анализ BCA любым другим анализам, совместимым с моющими средствами.

Много преимуществ анализа белка BCA

Популярность анализа BCA по сравнению с другими методами также можно объяснить рядом факторов, в том числе следующими:

• Анализ BCA очень чувствителен и имеет линейный диапазон 20–2000 мкг / мл.
• Он совместим с широким спектром ионных и неионных детергентов, а также с денатурирующими агентами, такими как мочевина и хлорид гуанидиния.
• Он похож на анализ Лоури, но, поскольку он более стабилен в щелочных условиях, его можно проводить как одностадийный процесс (анализ Лоури — двухэтапный процесс), что делает его в четыре раза проще и быстрее, чем классический метод Лоури.
• Это полезно для мониторинга загрязнения белком в промышленных приложениях.
• Он способен обеспечить большую однородность белка к белку, поскольку на него не сильно влияют различия в составе белка.
• Его можно использовать для оценки выхода лизатов целых клеток и фракций аффинной колонки.
• Подходит для количественного определения белковых растворов в анализах объемом 1 мл или микролунках.

Раскрытие ограничений анализа BCA

Анализ BCA не идеален. Вот некоторые ограничения, которые вам, возможно, придется учитывать.

• Реакция может быть менее чувствительной к типу аминокислот, присутствующих в растворе, но на реакцию влияют остатки цистеина, тирозина и триптофана.Присутствие этих аминокислот приведет к окрашиванию, которое может повлиять на ваши результаты.
• Присутствие в буфере восстанавливающих агентов, хелатирующих агентов меди, подкислителей, восстанавливающих сахаров, липидов и фосфолипидов также может повлиять на точность результатов.
• Интерпретация ваших результатов зависит от стандартной кривой для известного образца белка. Таким образом, для получения точных результатов необходимо одновременно анализировать образцы и известные белки, используя одинаковую температуру и время инкубации.
• Для анализа необходимо приготовить рабочий раствор из поставляемых реагентов.
• Для разработки анализа требуются длительные инкубации от 30 минут до 2 часов.

Альтернативы анализу BCA

Поскольку не существует анализа белка, который был бы специфичным и / или однородно чувствительным ко всем типам белков, вам необходимо иметь возможность выбрать наиболее совместимый анализ для вашего образца, выбрать соответствующий стандарт и справиться с ограничениями выбранного анализа.Чтобы помочь вам в этом, вот несколько отличных альтернатив анализу BCA, которые вы, возможно, захотите рассмотреть.

Анализ белка Лоури. Из-за его чувствительности, точности и простоты использования многие исследователи белков используют анализ Лоури для количественного определения растворимых белков в растворе. Анализ Лоури очень похож на анализ BCA, за исключением того факта, что он основан на двух химических реакциях (реакция щелочного сульфата меди в присутствии тартрата с образованием тетрадентатного комплекса меди и его последующее восстановление с использованием реагента Фолина для получения интенсивный синий цвет).При использовании этого метода влияние мешающих агентов, таких как Трис, ЭДТА, сульфат аммония, сахароза и цитрат, можно свести к минимуму с помощью метода осаждения, включающего TCA и DOC.

Биуретовый анализ белка. Анализ Biuret включает однократную инкубацию (20 минут) и содержит меньше мешающих агентов по сравнению с анализом Лоури.